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プロテオミクス解析によるニューロン・グリア分化における新たな転写制御機構の解明

通过蛋白质组学分析阐明神经元/胶质细胞分化的新转录控制机制

基本信息

批准号：
10J01220
负责人：
臼井紀好
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は運動ニューロンとオリゴデンドロサイトの発生に必須であるOlig2転写因子に着目し、神経幹細胞から、運動ニューロン、グリア前駆細胞、オリゴデンドロサイト、アストロサイトを産み出す過程におけるOlig2の役割を明らかにすることで多様な細胞種を産み出すメカニズムを明らかにすることを目的としている。前年度までにOlig2の網羅的プロテオミクス解析、及び免疫沈降法により、Olig2に結合する相互作用因子を複数同定し、in-situハイブリダイゼーション法を用いて遺伝子発現領域及び発現時期を解析した。また、Olig2のリン酸化修飾を明らかにし、リン酸化酵素の1つとしてGSK3 βを同定した。さらにニワトリ胎仔を用いたOlig2 Serl4非リン酸化フォームの強制発現実験を行い、成熟オリゴデンドロサイトのマーカーであるミエリンベーシックプロテイン(MBP)の異所性発現を観察した。本年度はOlig2リン酸化に重点をおいて解析を行い、ニワトリ胎仔を用いたin vivoプロモーターアッセイによって、Olig2 Serl4非リン酸化フォームがMBPプロモーターをアクティブにしていることを明らかにした。加えて、in vitroリン酸化アッセイを行い、前年度までに同定したGSK3 β以外に、Cdk5、JNKをOlig2 Serl4のリン酸化酵素として同定。JNKはOlig2に対して新規のリン酸化酵素である。そして、プロテオミクス解析で新たに同定した相互作用因子及び、既知の相互作用因子とOlig2の結合がOlig2 Serl4のリン酸化状態に依存して変化することを、Olig2 Serl4非リン酸化フォームを用いた免疫沈降法によって明らかにした。また、Olig2 Serl4のみを特異的に認識するリン酸化抗体作製を試みたが、抗体の認識部位近傍にも多数のリン酸化部位が存在するために、特異的に機能する抗体を得ることはできなかった。我々はOlig2転写因子を包括的に解析したことで、新規相互作用因子を複数同定、これらの因子がニューロン・グリア細胞分化において重要な役割を担っていることを明らかにしつつあり、今後も引続き解析を行う予定である。オリゴデンドロサイト分化におけるOlig2リン酸化の役割については、学術論文としてまとめ現在投稿準備中である。

In this study, it is necessary to make sure that the Olig2 factors are focused on the target, the cell, and so on. You need to know that you are not in the process of operating the Olig2 system. You are not required to use a variety of cell types. In the previous year, the immune sedimentation method was used to analyze the Olig2 network, the immune sedimentation method was used to determine the complex number of interaction factors, and the in-situ protocol was used to analyze the domain and the current time period. Amino acid, Olig2 acid, acid enzyme, acid enzyme, GSK3 β, acid enzyme, acid enzyme, acid enzyme The baby is not acidified by Olig2 Serl4. It is necessary to make sure that it is possible to observe the behavior of the baby, mature and mature. In this year's Olig2 acidizing, the key points are the analysis of the line, the use of the word "in vivo", the "baby", the "MBP", the "Olig2 Serl4", the "acidizing", the "acidification", the "acidification", Add "in vitro", "acidify", "acidify", "other than GSK3 β", "Cdk5", "JNK", "acidizing enzyme", "same". JNK, Olig2 enzymes, acidifying enzymes, acid enzymes. The new interaction factors were determined by the same method. The known interaction factors (Olig2) combined with Olig2 Serl4 (acidifying) were acidified. The Olig2 Serl4 was acidified and acidified. The immune sedimentation method was used. The antibodies were acidified by antibodies, most of the acidified sites were found in the acidified sites, and the specific antibodies were detected by the specific antibodies. The specific antibodies were detected by the specific antibodies. Our Olig2 writing factors include the same number of new rule interaction factors, the same complex number of new rule interaction factors, the same complex number of new rule interaction factors, the same complex number of new rule interaction factors, the same complex number of new rule interaction factors, and the same number of new rule interaction factors. We are now in the process of preparing for submission. We are now in the process of preparing contributions. We are now in the process of preparing contributions. We are now in the process of preparing for submission.