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ペプチド型希土類錯体を用いたタンパク質結合性多機能亜鉛蛍光プローブの開発

利用肽型稀土配合物开发蛋白质结合多功能锌荧光探针

基本信息

批准号：
10J01223
负责人：
平山祐
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Gifu Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J01223/
关键词：
蛍光プローブ希土類錯体亜鉛イメージング

项目摘要

本研究は細胞内における局所的亜鉛イオン濃度の変化を観測することを目指し,新しいタンパク質結合性亜鉛イオンプローブを創成するものである.当該期間において,亜鉛イオン検出部位としてのペプチド型亜鉛イオンプローブ分子cs-pep-Tbの設計・合成を行った.本プローブ分子は亜鉛イオンの配位部位として機能するペプチド鎖を有し,ペプチドの両末端にはエネルギードナー(cs124),およびエネルギーアクセプター(テルビウム錯体)を配置した.これにより,亜鉛イオンとの結合に伴いドナー・アクセプター間の距離が変化し,cs124およびテルビウムイオンからの発光強度比が変化するレシオ型の応答を示すため,細胞内において正確な定量分析が可能となる.cs-pep-Tbはcs124導入アミノ酸,テルビウム錯体,および通常のアミノ酸を用いたFmoc-ペプチド固相合成法により得られた.HPLCを用いて精製したcs-pep-Tbに対して各種金属イオンを添加したところ,蛍光スペクトル測定においては亜鉛イオンを添加したときのみcs124の蛍光強度減少とともにテルビウムイオン由来の発光強度の増大が見られた.すなわち,亜鉛イオン特異的にレシオ型の蛍光応答を示した.また,各種測定を行い,結合定数,テルビウムイオン由来の発光に関する物理的パラメータを算出した.さらに,亜鉛イオン認識部位としてのペプチド部位のアミノ酸配列を系統的に設計・合成し,それぞれについて上記の測定を行い,発光強度およびその変化値,結合定数等を総合的に考慮し,本研究の最終目的である局所的亜鉛濃度変化の観測への応用に最適なものを見出した.

This study aims to determine the change of lead concentration in intracellular cells, and to establish a new method for the formation of lead binding protein. During this period, the molecular cs-pep-Tb was designed and synthesized. This molecule has the ability to select the coordination site of the lead atom and function, select the end of the molecule and configure it (cs124), and select the end of the molecule. In this case, the distance between the two groups varies, and the ratio of emission intensity varies. The correct quantitative analysis of intracellular substances is possible.cs-pep-Tb changes with the introduction of cs124. In general, Fmoc-Tb solid phase synthesis method was used to purify the solvent. In addition, Fmoc-Tb was used to add various metals to the solvent. In addition, Fmoc-Tb was used to determine the solvent. In addition, Fmoc-Tb was added to the solvent. The light source of the light source is different from the light source of the light source. In addition, various kinds of measurements are carried out, combined with fixed numbers, and the physical parameters of the light source are calculated. In this paper, the author designs and synthesizes the system for determining the concentration of lead in the samples, and considers the variation of the emission intensity and the combination of the constant number.