転写因子のタンパク質間相互作用ネットワークの解析

转录因子的蛋白质-蛋白质相互作用网络分析

• 批准号: 10J02717
• 负责人: 児玉 豊
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J02717/
• 关键词: 植物; タンパク質; 二分子蛍光補完; 蛍光タンパク質; green fluorescent protein; BiFC; スクリーニング; GFP

本研究では、新しいタンパク質間相互作用スクリーニング法を用いて、植物のタンパク質リン酸化経路における転写因子のタンパク質間相互作用ネットワークの解明を目的とする。本年度は、蛍光タンパク質の構造補完をベースにした二分子蛍光補完(BiFC)法を用いたタンパク質間相互作用のスクリーニング法を植物で開発するため、変異型緑色蛍光タンパク質GFP-S65Tの改良を行った。BiFC法とは、蛍光タンパク質を中央付近で切断した二つの断片を、結合を調べたい二つのタンパク質にそれぞれ融合し、細胞内で蛍光タンパク質の構造の再構築を蛍光で検出するin vivo解析法である。GFP-S65Tタンパク質は、現在、広く利用されている緑色蛍光タンパク質であり、多くの研究装置がGFP-S65Tタンパク質に最適化されている。実際、本研究で利用する殆どの装置がGFP-S65Tを検出するのに適していた。しかし、本研究で利用するタンパク質間相互作用スクリーニング法のベースとなるBiFC法にGFP-S65Tタンパク質を供した場合、構造の再構築後に検出される蛍光の輝度が非常に低い問題があった。そこで、高感度なスクリーニング法を構築するため、GFP-S65Tタンパク質を用いたBiFC法の蛍光輝度を上昇させる変異を探索した。その結果、GFP-S65Tタンパク質に点変異V163Aを導入することによって、蛍光輝度が従来の7倍ほど上昇することを発見した。また点変異V163Aの導入は、GFP-S65Tタンパク質の蛍光スペクトルに影響を与えないこともわかった。これらの結果は、GFP-S65T/V163Aタンパク質を用いた高輝度緑色BiFC法がGFP-S65Tタンパク質に最適化された解析装置によって利用できることを示している。今後、これを用いた新しいスクリーニング法を開発する予定である。

This study aims to explore the application of novel mass-to-mass interaction (MIR) method to the study of the factors involved in the molecular mechanism of plant acidification. This year, the BiFC method was used to improve the development of plants by using the BiFC method, and the modified BiFC method was used to improve the GFP-S65T. BiFC method: In vivo analysis method, the structure of light in cells is reconstructed. GFP-S65T quality optimization, optimization, optimization of GFP-S65T quality optimization, optimization of GFP-S65T quality optimization In fact, this study uses the device to detect the GFP-S65T. In this study, the GFP-S65T system was investigated by using the mass-to-mass interaction method and the BiFC method, and the problem of extremely low luminance was found after the reconstruction of the structure. GFP-S65T high sensitivity BiFC high brightness As A result, the GFP-S65T has been introduced into the system, and the brightness of the system has increased by 7 times. The introduction of V163A and GFP-S65T is a key factor affecting the quality of the product. The result is that the GFP-S65T/V163A has been optimized by the Green BiFC method. In the future, we will develop new methods to improve the quality of our products.

项目成果

A bright green-colored bimolecular fluorescence complementation assay in living plant cells.

活植物细胞中的亮绿色双分子荧光互补测定。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Plant Biotechnology
• 影响因子: 1.6
• 作者: Shuji Nakamura;Yoshiaki Yamauchi;Masayuki Hashisaka;Kensaku Chida;Kensuke Kobayashi;Teruo Ono;Renaud Leturcq;Klaus Ensslin;Keiji Saito;Yasuhiro Utsumi;Arthur C.Gossard;小林研介;荒川智紀;西原禎孝;中村秀司;知田健作;中村秀司;知田健作;荒川智紀;Kensaku Chida;Kensaku Chida;Kensuke Kobayashi;Shoji Nakamura;Kensaku Chida;Yutaka Kodama
• 通讯作者: Yutaka Kodama

遺伝子間隙に存在するshort open reading frameの機能解析

基因间隙中存在的短开放阅读框的功能分析

• 发表时间: 2011
• 作者: 樋口美栄子;吉積毅;花田耕介;児玉豊;清水みなみ;堀井陽子;川島美香;松井敬子;松井南
• 通讯作者: 松井南

WEB1/PMI2による青色光依存的葉緑体アクチン繊維動態の制御

WEB1/PMI2 对叶绿体肌动蛋白纤维动力学的蓝光依赖性调节

• 发表时间: 2011
• 作者: 児玉豊;末次憲之;孔三根;和田正三
• 通讯作者: 和田正三