ハイスループットな単一細胞遺伝子発現解析ツールの開発

高通量单细胞基因表达分析工具的开发

• 批准号: 10J03521
• 负责人: 古谷 俊介
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Soka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J03521/
• 关键词: RT-PCR; ジャーカットセル; GAPDH; シングルセル; Compact Disk; ハイスループット

生命の最小単位は細胞である。そのため、医療の分野や生命の本質を探るような研究分野では単一細胞レベルでの情報を得ることが必要とされている。本研究では、1つの反応容器内で熱変化のみで細胞から直接RT-PCRを行う、Hot cell-direct RT-PCRを考案し、単一細胞分離と単一細胞レベルでのHot cell-direct RT-PCRによる発現遺伝子の検出が一つのデバイス上で可能かを検討した。真核生物のモデル細胞としてヒト白血球ガン細胞のJurkat cellを用いて、そのハウスキーピング遺伝子であるGAPDHのmRNAをターゲットとして研究を行った。一般的なCell-direct RT-PCRでは、lysis bufferで細胞を破壊した後に、RT-PCR試薬と混合し、反応を行う必要がある。しかし、本研究では細胞の単離を行った後、そのまま溶液交換を行わずに細胞から直接RT-PCRを行う必要があるため、細胞からワンステップでのRT-PCR手法について検討を行った。シンプルな細胞の破壊方法としては熱による細胞の破壊方法がある。しかし、一般的な逆転写酵素では細胞膜を破壊するために高温にした際、熱で酵素が失活してしまう。そのために、本研究では高温条件下でも失活せず、逆転写活性を持つTth polymeraseを使用した。結果、細胞からの直接RT-PCRが可能であり、Hot cell-direct RT-PCR後の電気泳動結果から、GAPDHのmRNAだけを検出する事が可能であることが確認された。さらに、細胞単離デバイス上での細胞からの直接RT-PCRの条件も検討し、実際に細胞を単一分離し、RT-PCRによって発現遺伝子の増幅に成功した。

The smallest unit of life is the cell.そのため, medical division and the nature of life, exploration and research division, and research division, では単一cell, information and information, necessary and necessary. The purpose of this study is to use heat-treated cells in the reaction container to perform direct RT-PCR, Hot cell-direct RT-PCR test case, and single cell isolation and single cell isolation. RT-PCR is now possible and is possible. Eukaryotic cells, leukocytes, leukocytes, Jurkat cells cellをいて、そのハウスキーピング伝子であるGAPDHのmRNAをターゲットとして research を行った. Generally speaking, Cell-direct RT-PCR is necessary, lysis buffer is broken and cells are broken, RT-PCR test solution is mixed, and reaction is necessary.しかし、This study is carried out after the separation of cells and the solution exchange of cells and the direct RT-P of cells CR を line う が あ る た め, cell か ら ワ ン ス テ ッ プ で の RT-PCR technique に つ い 検 question を 行 っ た.シンプルな Cell の 壊 Method と し て は 热による Cell の 壊 Method がある. Normally, enzymes can be broken down by high temperature, and enzymes can be inactivated by heat. In this study, the deactivation under high temperature conditions and the reverse writing activity of Tth polymerase were used. Result, cell-direct RT-PCR is possible, hot cell-direct RT-PCR is electrophoresis result, GAPDH mRNA is out, it is possible, confirmation is possible.さらに、Cell isolation デバイス上でのcell からのDirect RT-PCR conditions も検 Discussion し、 The cells were isolated and the RT-PCR was successfully amplified.

项目成果

RT-PCR of isolated single cells on a Compact Disk (CD)-shaped device

在光盘 (CD) 形状的装置上对分离的单细胞进行 RT-PCR

• 发表时间: 2011
• 作者: Kikuta;Shin;菊田伸;菊田伸;菊田伸;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Izumi Kubo;古谷俊介;齋藤翼;新井一幸;小椋功太郎;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani
• 通讯作者: Shunsuke Furutani

細胞単離ディスクを用いたBacillus cereus特異遺伝子の迅速同定法の検討

使用细胞分离盘快速鉴定蜡状芽孢杆菌特异性基因的方法的检验

• 发表时间: 2012
• 作者: Kikuta;Shin;菊田伸;菊田伸;菊田伸;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Izumi Kubo;古谷俊介;齋藤翼;新井一幸
• 通讯作者: 新井一幸

Single cell separation and characterization on Compact Disk (CD) shaped micro fluidic device

光盘 (CD) 形微流体装置上的单细胞分离和表征

• 发表时间: 2010
• 作者: Kikuta;Shin;菊田伸;菊田伸;菊田伸;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Izumi Kubo;古谷俊介;齋藤翼;新井一幸;小椋功太郎;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani
• 通讯作者: Shunsuke Furutani

単離細胞の有する遺伝子検出のためのPCR用マイクロ流路ディスク

用于检测分离细胞中基因的 PCR 微通道盘

• 发表时间: 2010
• 作者: Kikuta;Shin;菊田伸;菊田伸;菊田伸;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Izumi Kubo;古谷俊介;齋藤翼;新井一幸;小椋功太郎;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;久保いづみ;久保いづみ
• 通讯作者: 久保いづみ

Centrifugal Flow Disk for the Detection of the Specific Gene by PCR in the Isolated Cells

用于通过 PCR 检测分离细胞中特定基因的离心流盘

• 发表时间: 2010
• 期刊: Chemical Sensors
• 作者: Kikuta;Shin;菊田伸;菊田伸;菊田伸;Shunsuke Furutani;Shunsuke Furutani;Izumi Kubo
• 通讯作者: Izumi Kubo