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核内糖修飾シグナルにおける新規エピジェネティック制御因子の探索

寻找核糖修饰信号的新型表观遗传调节因子

基本信息

批准号：
10J04044
负责人：
橋場和華
金额：
$ 0.9万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、核内における糖修飾が関与する新しいタンパク質機能制御を明らかにすることが目的である。そこで2年目は、以下の2点に関して研究を実施した。昨年度に引き続き、クロマチン上における糖修飾化因子の遺伝子発現上の重要性に関する研究をおこなった。生化学的手法による探索の結果、ヒストンの中でもH2Bが核内糖修飾化酵素(OGT)によって、糖修飾(O-GlcNAc化)されることが明らかになった。また、ヒストンH2BのO-GlcNAc化部位はC末端側のSer112であることが明らかになった。近年、ヒストンの修飾同士のクロストークも遺伝子発現制御に重要である事が明らかになっている。そこで、H2BS112近傍のヒストン修飾とクロストークがあるかどうかを検討した。その結果、H2BK120のユビキチン化にS112のO-GlcNAc化が影響を与えることを見出した。さらにH2BK120のユビキチン化は、転写を活性化するヒストン修飾であるH3K4のメチル化を促進することから、ヒストンのO-GlcNAc化は遺伝子発現を正に制御することが明らかになった。これらの成果は、第二著者としてNaure誌の一部として掲載された。(Fujiki R,Hashiba W,et al,Histone H2B GlcNAcylation facilitates its monoubiquitilation,Nature,2011,480,557-560)昨年度は、O-GlcNAc化H2Bに対する認識因子(核内レクチン)の探索をおこなってきた。ペプチドプルダウンを用いた、精製の結果、HSP70を同定することができた。しかしながら、HSP70はO-GlcNAc基を認識するレクチンとして報告されているが、ヒストンを特異的に認識するモチーフはなかった。さらに様々な検討をおこなってきたが、HSP70以外の新規核内レクチンの同定には至らなかった。つまり、これまでの結果から言える事は、一般的な精製法では核内レクチンを精製することが難しいことが明らかになった。そこで、視点を変えて、グルコースで制御されるクロマチン因子群の精製を試みることにした。この方法を用いればグルコースに応答するクロマチン因子の同定が可能であり、また、核内レクチンもこの中に含まれる可能性が高い。Flagタグ付きのヒストンH2Bをベイトとし、その安定発現株を取得した。その後、グルコース有無の条件下で細胞を培養し、アフィニティ精製に供した。また、精製産物はLC-MS/MSによって網羅的に同定された。その結果、グルコース有無によって、結合が異なる因子群の同定に成功にした。

This study is aimed at understanding the relationship between sugar modification and nuclear function. 2 years ago, the following 2 points were discussed. Research on the importance of gene expression of carbohydrate modifiers As a result of the biochemical approach, H2B was found in the middle of the reaction, and the enzyme was modified by OGT and O-GlcNAc. The O-GlcNAc site on the C-terminal side of H2B was identified as Ser112. In recent years, the development of new technologies has become an important issue for the development of new technologies.そこで、H2BS112近傍のヒストン修饰とクロストークがあるかどうかを検讨した。As a result, H2BK120 and S112 have been transformed into O-GlcNAc. H2BK120's O-GlcNAc is activated, modified, and promoted by H3K4's O-GlcNAc. The second author of this book is a part of Naure's book. (Fujiki R,Hashiba W,et al,Histone H2B GlcNAcylation facilitates its monoubiquitisation,Nature,2011,480,557-560). The results of the refinement of HSP70 are consistent with those of the previous study. The HSP70 has a unique O-GlcNAc base recognition function. The new rules and regulations except HSP70 The result of this process is that it is difficult to refine the core. For example, if you want to make a decision, you can make a decision. This method is highly likely to be used to determine the identity of the response factor. The Flag was raised and the flag was raised. The cells were cultured in the presence or absence of the enzyme LC-MS/MS analysis of purified products The results, the presence or absence of a group of factors, the combination of different factors, and the success of the group

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

KIAA1718 is a histone demethylase that erases repressive histone methyl marks

DOI：
10.1111/j.1365-2443.2010.01424.x
发表时间：
2010-08-01
期刊：
GENES TO CELLS
影响因子：
2.1
作者：
Yokoyama, Atsushi;Okuno, Yosuke;Kato, Shigeaki
通讯作者：
Kato, Shigeaki

生化学的手法による新規ヒストンH2B相互作用因子の探索

使用生化方法寻找新的组蛋白 H2B 相互作用因子

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yokoyama A;et.al.;橋場和華
通讯作者：
橋場和華

GlcNAcylation of histone H2B facilitates its monoubiquitination.

DOI：
10.1038/nature10656
发表时间：
2011-11-27
期刊：
Nature
影响因子：
64.8
作者：
Fujiki R;Hashiba W;Sekine H;Yokoyama A;Chikanishi T;Ito S;Imai Y;Kim J;He HH;Igarashi K;Kanno J;Ohtake F;Kitagawa H;Roeder RG;Brown M;Kato S
通讯作者：
Kato S

Multiple post-translational modifications in hepatocyte nuclear factor 4α