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イソキノリンアルカロイド生合成系における転写因子ネットワークの解析

异喹啉生物碱生物合成系统转录因子网络分析

基本信息

批准号：
10J05542
负责人：
山田泰之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ベルベリン生合成系の新規遺伝子発現調節因子、新規転写因子の探索のために、GFP抗体を用いた共免疫沈降(Co-IP)、ならびにLC-MS/MS解析により転写因子の相互作用因子の同定を試みた。その結果、調節因子や転写因子のようなタンパク質は同定されなかったが、CjbHLH1,CjWRKY1ともに翻訳後修飾による制御を受けている可能性が示唆された。一方、ESTの再アノテーションとce11 1ine間での発現比較、さらに二本鎖RNAを用いた一過的RNAiスクリーニングを行ったが、新たな転写因子を得るにはいたらなかった。2.sGFP-CjbHLH1を導入したハナビシソウ培養細胞株を複数ライン確立し、ゲノムPCRやqRT-PCR解析、および抗CjbHLH1抗体を用いたウェスタン解析を行い、形質転換体におけるsGFP-CjbHLH1の発現を確認した。一方、サンギナリン生合成に関わる酵素遺伝子の発現量は、コントロールとの間に差は見られず、単独での過剰発現ではほとんど生合成系に影響が見られない可能性が示唆された。また、ハナビシソウCjbHLH1ホモログ、EcbHLH1の37bpRNAi発現抑制株も複数ライン確立し、抑制の強い株の選抜を進めている。3.ジャスモン酸シグナル伝達系に関わるMYC2ホモログやJAZがベルベリン生合成系の制御に関わるかどうかを調べるために、オウレン、ハナビシソウからそれぞれMYC2遺伝子を、さらにオウレンから2つのJAZ遺伝子を単離し、これらの遺伝子の発現がMeJAに対して応答することを確認した。また、ce11 1ine間でのCjMYC2遺伝子の発現比較やハナビシソウ植物体におけるEcMYC2の組織別発現解析を行ったが、生合成酵素遺伝子の発現との相関は見られなかった。さらに、一過的RNAiによるCjMYC2の発現抑制の影響は一部の生合成酵素遺伝子に限定されており、その抑制効果もCjbHLH1に比べると低かった。また、CjbHLH1やCjwRKY1の発現量には全く影響が見られず、これらの因子は独立に制御を受けている可能性が示唆された。一方、CjJAZについては一過的過剰発現により生合成酵素遺伝子の発現量が減少していたことから、リプレッサーとして機能していることが示唆された。

1. ベルベリン raw GeChengXi の new rules but 伝 son 発 adjustment factor, the new rules now planning to write factor の explore のために, GFP antibody をいた were immune to sink (Co - IP), ならびに LC - MS/MS analytical によりの planning write factor の interaction factors might be を try みた. その results, regulating factor や planning write factor のようなタンパク qualitative は with fixed されなかったが, CjbHLH1 CjWRKY1 ともに modification after turn 訳による suppression を by けていがる possibility in stopping された. Party, EST のアノテーションと ce11 between 1 fine での発 now compare, さらに 2 lock RNA を with いた one of RNAi スクリーニングを line ったが, new たな planning write factor を must るにはいたらなかった. 2. SGFP - CjbHLH1 を import したハナビシソウ culture cell lines を plural ライン establishing し, ゲノム PCR や qRT - PCR parsing, および CjbHLH1 antibody を resistance with いたウェスタン parsing をい, form quality planning in body における sGFP - CjbHLH1 の発を now confirmed した. Side, サンギナリン biosynthesis に masato わる enzyme heritage 伝 son の発 now は, コントロールとのに difference between は see られず, 単 alone での before turning 発 now ではほとんど raw GeChengXi に influence が see られながい possibility in stopping された. また, ハナビシソウ CjbHLH1 ホモログ, EcbHLH1 の 37 bprnai 発 now inhibit plant も plural ライン establish し, strong inhibition のいの strains selected sorting を into めている. 3. ジャスモン acid シグナル伝 da system に masato わる MYC2 ホモログや JAZ がベルベリン raw GeChengXi の suppression に masato わるかどうかを adjustable べるために, オウレン, ハナビシソウからそれぞれ MYC2 heritage 伝を, さらにオウレンから 2 つの JAZ heritage 伝 son を単し, これらの heritage 伝 son の発が now MeJAに to て応 to するするとを to confirm た. また, 1 between fine ce11 での CjMYC2 posthumous son 伝の発 now compare やハナビシソウ plant における EcMYC2 の organizations don't 発 now line analytical をったが, biosynthesis enzyme but 伝の発 now との phase masato は see られなかった. さらに, one of RNAi による CjMYC2 の発 is の effect は a の biosynthesis enzyme heritage 伝 son に qualified されており, その inhibition of unseen fruit も CjbHLH1 に than べると low かった. また, CjbHLH1 や CjwRKY1 の発 now quantity にはく affect all が see られず, これらの factor は independent に suppression を by けていがる possibility in stopping された. Side, CjJAZ については one of turning 発 now により biosynthesis enzyme heritage 伝 son の発 now decrease がしていたことから, リプレッサーとして function していることが in stopping された.