酵母ユビキチンリガーゼRsp5による異常タンパク質の分解とその制御機構の解明

酵母泛素连接酶Rsp5降解异常蛋白及其调控机制的阐明

• 批准号: 10J09119
• 负责人: 佐々木 俊弥
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: Nara Institute of Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J09119/
• 关键词: ユビキチン; Rsp5; パーミアーゼ; 異常タンパク質; タンパク質分解; エンドサイトーシス; ストレス

出芽酵母において高濃度エタノール添加後にGap1がエンドサイトーシスを起こす現象をこれまでに見出した。エタノールをストレスとしてセンサーで感知しているのか、Gap1のアンフォールディングそのものを認識しているのか、この現象の引き金を明らかにすべく、Gap1温度感受性変異体の取得を目指した。もし、変性を認識するのであれば、高温時にアンフォールディングしたGap1をRsp5がユビキチン化し、エンドサイトーシスを起こすと考えられた。このスクリrニングでは、高温でGap1が変性した場合のみ生育するように、プロリン毒性アナログ培地によるポジティブセレクションを行ったが、残念ながら、本年度での取得には至らなかった。一方、Rsp5のリン酸化については、これまで用いていた抗リン酸化Rsp5血清によるリン酸化Rsp5の検出感度を上げるため、抗体のアフィニティー精製を行った。その結果、リン酸化Rsp5の検出感度が大幅に増加したが、資化しにくい窒素源を用いて培養した場合、リン酸化されないはずのRsp5ミュータント(T357A-Rsp5)でもバンドが検出された。このことから、おそらく予想していたThr357以外にも、Rsp5内に保存された同様のドメイン内のThrがリン酸化されているのではないかと考えられた。Gap1認識を仲介するアダプターであるBul1/2とT357A-Rsp5の結合を共免疫沈降法で検出した。T357Aのミュータントではアダプターとの結合能が上がると予想しており、Bul2に関してはその傾向が見られた。しかし、強制発現プロモーターを用いているにも関わらず、BUl1/2の発現量が一定にはならず、特に357A-Rsp5発現株においては、野生株よりも発現量が低かった。これらのことから、当初考えていた単純では描ききれないファクターが残されていると考えられる。Rsp5のリン酸化に関わるキナーゼ・フォスファターゼを当初の予定通りスクリーニングした。その中からフォスファターゼの候補としてSit4が見出された。

After the addition of Gap1 yeast, the sprouting yeast has a high degree of temperature, and then the yeast has been added. Please tell me that you are aware of the problem, that is, the Gap1 sensor, the Gap1 thermoreceptor, the target sensor, the temperature sensor and the temperature sensor. When the temperature is high, the temperature is very high. When the temperature is high, the Gap1, Rsp5, temperature, temperature and temperature do not change. High temperature, high temperature Gap1, high temperature, high On the one hand, Rsp5 was used to acidify the serum of Rsp5, the serum of Rsp5 was acidified, and the antibody was used in the sensitivity test. The results showed that the sensitivity of acidified Rsp5 was significantly increased, the source of asphyxiant was significantly increased, and the source of asphyxiant was detected by incubation and acidification. the results showed that the sensitivity of acidified Rsp5 was significantly higher than that of normal saline (T357A-Rsp5). You don't want to save anything outside of Thr357, save it in Rsp5, save it in the same way as Thr, acid it, acid it, and test it. Gap1 was used as a referral agent, and Bul1/2 T357A-Rsp5 was used in combination with co-immunoprecipitation method. The combination of T357A and T357A can tell you that you want to make sure that you don't want to, and that you can use Bul2 to make sure that you don't want to. Make sure that the concentration of BUl1/2, 357A-Rsp5, wild plant and wild plant is low. In the first place, I didn't know what to do. I didn't know what to do. I didn't know what to do. Rsp5 acidified in the first place, in the first place, in the first place. In the middle of the day, please wait for the Sit4 to leave the room.

项目成果

出芽酵母の恒常的活性型ユビキチンリガーゼRsp5の機能解析

酿酒酵母中组成型活性泛素连接酶 Rsp5 的功能分析

• 发表时间: 2010
• 作者: Kuwahara T;et al;佐々木俊弥;佐々木俊弥
• 通讯作者: 佐々木俊弥

酵母の恒常的活性型ユビキチンリガーゼRsp5によるプロリンパーミアーゼの活性制御

组成型活性酵母泛素连接酶 Rsp5 对脯氨酸通透酶活性的调节

• 发表时间: 2010
• 作者: Kuwahara T;et al;佐々木俊弥
• 通讯作者: 佐々木俊弥

The yeast ubiquitin ligase Rsp5 activity is regulated through phosphory lation of a highly conserved Thr357 in the Nedd4 family

酵母泛素连接酶 Rsp5 活性通过 Nedd4 家族中高度保守的 Thr357 的磷酸化来调节

• 发表时间: 2011
• 作者: N.Fukazawa;T.Ishikawa;Y.Okimoto;S.Koshihara;K.Onda;H.M.Yamamoto;R.Kato;佐々木俊弥
• 通讯作者: 佐々木俊弥

Functional analysis of the constitutively active variant of the ubiquitin ligase Rsp5 on the regulation of proline permease activity in Saccharomyces cerevisiae.

泛素连接酶 Rsp5 组成型活性变体对酿酒酵母脯氨酸通透酶活性调节的功能分析。

• 发表时间: 2010
• 作者: 石舟智恵子;他;Toshiya Sasaki
• 通讯作者: Toshiya Sasaki

出芽酵母のエタノールストレス下における原形質膜タンパク質分解機構の解析

酿酒酵母乙醇胁迫下质膜蛋白降解机制分析

• 发表时间: 2011
• 作者: N.Fukazawa;T.Ishikawa;Y.Okimoto;S.Koshihara;K.Onda;H.M.Yamamoto;R.Kato;佐々木俊弥;佐々木俊弥
• 通讯作者: 佐々木俊弥