in vitro肝組織再構築システムによる肝炎モデルの開発

肝組織の新たな細胞ソースとして増殖性を有する肝前駆細胞に着目した。本研究では実際に臨床応用を考えた際には行う事の出来ない化学薬品を用いた手法ではなく、ヒトへの応用が可能な門脈結紮により肝再生を誘発し肝臓内に肝前駆細胞増殖させ、コラゲナーゼ灌流法により単離し、限界希釈法で精製を行い肝前駆細胞の調製をおこなった。この肝前駆細胞を細胞ソースとし、閉鎖循環式バイオリアクターを用いて肝組織形成をおこなった。肝前駆細胞を用いることで初代培養肝細胞と比較して顕著な細胞生存の改善が見られた。遺伝子発現解析においても、肝前駆細胞は2次元単純培養では観られなかった成熟肝細胞のマーカーであるトリプトファン・ジオキシゲナーゼを、さらに胆管上皮細胞のマーカーであるサイトケラチン19も発現していた。組織学的な解析により、作製した肝組織は2核の肝細胞と胆管の形成が確認された。また、今回作製したin vitro肝組織の移植へ向けた検討をおこなった。移植した細胞挙動のより簡便な解析を可能とするため、赤色蛍光タンパク質発現マウスから胎仔繊維芽細胞を調製し、緑色蛍光タンパク質発現マウスより門脈結紮法により肝前駆細胞の調製をおこなった。この蛍光タンパク質発現細胞を各々用い作製した肝組織を、70%部分肝切除を行った野生型マウスの皮下と腸間膜上に移植した結果、マウス生体内で作製した肝組織が生着していることが確かめられ、肝組織内への血管侵入も観察された。比較実験としておこなったマトリゲル抱埋では、血管の新生が観られなかった。このことから、作製したコラーゲン細線維マトリックスはコラーゲン細線維に沿って血管の新生が誘導されやすいマトリックスであることが確認され、その移植へ向けた検討として前進したと考えられる。

肝組織の新たな細胞ソースとして増殖性を有する肝前駆細胞に着目した。本研究では実際に臨床応用を考えた際には行う事の出来ない化学薬品を用いた手法ではなく、ヒトへの応用が可能な門脈結紮により肝再生を誘発し肝臓内に肝前駆細胞増殖させ、コラゲナーゼ灌流法により単離し、限界希釈法で精製を行い肝前駆細胞の調製をおこなった。この肝前駆細胞を細胞ソースとし、閉鎖循環式バイオリアクターを用いて肝組織形成をおこなった。肝前駆細胞を用いることで初代培養肝細胞と比較して顕著な細胞生存の改善が見られた。遺伝子発現解析においても、肝前駆細胞は2次元単純培養では観られなかった成熟肝細胞のマーカーであるトリプトファン・ジオキシゲナーゼを、さらに胆管上皮細胞のマーカーであるサイトケラチン19も発現していた。組織学的な解析により、作製した肝組織は2核の肝細胞と胆管の形成が確認された。また、今回作製したin vitro肝組織の移植へ向けた検討をおこなった。移植した細胞挙動のより簡便な解析を可能とするため、赤色蛍光タンパク質発現マウスから胎仔繊維芽細胞を調製し、緑色蛍光タンパク質発現マウスより門脈結紮法により肝前駆細胞の調製をおこなった。この蛍光タンパク質発現細胞を各々用い作製した肝組織を、70%部分肝切除を行った野生型マウスの皮下と腸間膜上に移植した結果、マウス生体内で作製した肝組織が生着していることが確かめられ、肝組織内への血管侵入も観察された。比較実験としておこなったマトリゲル抱埋では、血管の新生が観られなかった。このことから、作製したコラーゲン細線維マトリックスはコラーゲン細線維に沿って血管の新生が誘導されやすいマトリックスであることが確認され、その移植へ向けた検討として前進したと考えられる。