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オンチップスクリーニングと1細胞時系列イメージングによる細胞運動因子のキノーム解析

使用芯片筛选和单细胞时间序列成像对细胞运动因子进行激酶组分析

基本信息

批准号：
10J40105
负责人：
長崎玲子
金额：
$ 1.86万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

細胞運動は、器官形成などにおいて重要な役割を担うだけでなく、がん細胞の浸潤にも関与している。しかし細胞運動の制御過程は複雑であり、未だ断片的な知識しか得られていない。そこで本研究では、独自技術である細胞運動評価チップを用いて細胞運動調節因子を全キナーゼ及び関連因子群からスクリーニングする。さらに細胞外マトリックス依存的に発現誘導を受ける遺伝子の情報と上述の結果の統合することで、転写レベルのECM依存的発現誘導からがんの悪性度を左右する細胞運動調節キナーゼの活性化に至る一連の作用機序について理解を深める。本年度では実験条件の最適化が容易に可能となり、安定的に細胞運動を再現する環境が整ったため、一次スクリーニングで絞り込まれた遺伝子を再評価した。昨年度の結果に対して24遺伝子が残り、新たに6遺伝子が同定された。新規同定6遺伝子に対するsiRNAの抑制効果を確認したところ、5遺伝子で抑制効果が確認できた。新規同定6遺伝子は該当しなかったが、24遺伝子のうち3遺伝子が昨年度報告したように細胞外マトリックス依存的に発現誘導を受ける遺伝子と重複した。さらに、L2b細胞とL2bの亜種でありコラーゲン依存的な細胞運動が遅いT1細胞との間で上記遺伝子の発現量を比較したところ、L2b細胞での発現が上記とは別の3遺伝子について高くなった。また、新規同定6遺伝子の細胞内局在も検討したところ、細胞膜、小胞体、移行型小胞体、細胞質に局在した。さらにタンパク間相互作用のデータベースを用いて30遺伝子について最短経路を描画した結果、EGFRを中心としたパスウエイが浮かび上がった。すなわちEGFRを抑制することですべての細胞運動のシグナルを停止させることが可能であると思われる。以上のことから、我々のスクリーニング手法で浮かび上がってきた遺伝子群は局在・機能も多様であったが、パスウェイ解析の結果最上流にEGFRがあることが示唆された。

Cell movement is important for organogenesis and cell infiltration. The control process of cellular movement is complex and fragmented. This study is based on the independent technique of cell movement evaluation and application, and cell movement regulatory factors and related factors. To further understand the mechanism of action in the regulation of cell movement, the induction of extracellular, ECM-dependent expression, and the integration of the information and the above results. This year, the optimization of the conditions is easy, stable, and the environment for the reproduction of cell movement is re-evaluated. Last year's results showed that 24 copies of the text were incomplete, and 6 copies of the text were unchanged. The new regulation confirms the siRNA suppression effect of 6 vectors and 5 vectors. The new regulation is based on the following 6 genes and 24 genes. The 3 genes and 24 genes are reported in the annual report. In addition, L2b cells and L2b cells are dependent on cell movement, and T1 cells and L2b cells are dependent on cell movement. The cellular structure of the 6 genes is in the cell membrane, small cell body, transitional small cell body and cytoplasmic structure. The interaction between EGFR and EGFR is described in the shortest possible path with 30 vectors. EGFR inhibition may be caused by cell movement inhibition. The result of the above analysis is the highest level of EGFR.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Microdevice for cell migration assays using reverse-transfection

使用反向转染进行细胞迁移测定的微型装置

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
西中由美子;永森收志;金井好克外;Junko Enomoto
通讯作者：
Junko Enomoto

Construction of high dense transfected cell microarray

高密度转染细胞微阵列的构建

DOI：
发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
0
作者：
Nagamori S;Umemura Y;Wiriyasermkul P;Nakagomi S;Nishinaka Y;Takafuji K;Ohgaki R;Kanai Y;Satoshi Fujita
通讯作者：
Satoshi Fujita

Identification of migration relating kinases using cell chip based on transfection micro array technology

基于转染微阵列技术的细胞芯片鉴定迁移相关激酶