癌細胞で発見した成熟mRNAの再スプライシング現象の検証とその制御機構の解明

验证癌细胞中发现的成熟mRNA重剪接现象并阐明其控制机制

• 批准号: 21657033
• 负责人: 亀山 俊樹
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21657033/
• 关键词: 成熟mRNA再スプライシング; 癌細胞; スプライシング; RNage R; TSG101; TP53BP2; FHIT; RT-PCR; RNase R

昨年度の研究により、(1)スプライシングが完了している成熟mRNAと同等と考えられる外来cDNAを強制発現し、外来cDNAに由来するイントロンのないmRNAからも異常スプライシング産物ができることを確認した。次に(2)細胞内在性の全RNAを生成し、ブランチ部位を挟んだプライマーセットによるRT-PCRによりmRNA由来すなわちエクソンの配列のみを持つ、投げ縄状RNAスプライシング中間産物を検出した。最後に(3)一回のマルチプルエクソンスキッピングと潜在的スプライス部位が同時に起こる「直結異常スプライシング」も『成熟mRNA再スプライシング仮説』の対立仮説としてその可能性が考えられるため、その検証を行った結果、「直結異常スプライシング」に良って生じる巨大な投げ縄状RNA中間体が無いことが明らかとなった。以上3種の異なる実験結果から癌細胞で『成熟mRNA再スプライシング』が起きている事を検証出来た。しかしながら、この現象はTSG101遺伝子のみにおこる特殊なものなのではないかという批判が多く寄せられてきた。それに答え、『成熟mRNA再スプライシング』現象が、各種癌細胞で普遍的に起きてしまうことを示すためTSG101遺伝子以外で同様な『成熟mRNA再スプライシング』現象が起きるかを探索した。その結果、Fragile histidine triad(FHIT)遺伝子、TP53BP2遺伝子においても『成熟mRNA再スプライシング』現象が起きることを発見した。以上のことから、癌細胞で『成熟mRNA再スプライシング』は普遍的に起きる現象であり、正常細胞には備わっているが癌細胞では失われる成熟mRNAがそれ以上スプライシングされることを抑制するような機構が存在することがさらに強く示唆された。

Yesterday's annual の research に よ り, (1) ス プ ラ イ シ ン グ が finished し て い る mature mRNA と equal と え test ら れ る foreign cDNA を forced 発 し now, foreign cDNA に origin す る イ ン ト ロ ン の な い mRNA か ら も abnormal ス プ ラ イ シ ン グ product が で き る こ と を confirm し た. に (2) the cell inner の total RNA を generate し, ブ ラ ン チ parts を carry ん だ プ ラ イ マ ー セ ッ ト に よ る rt-pcr に よ り mRNA origin す な わ ち エ ク ソ ン の match column の み を hold つ, cast げ 縄 shape RNA ス プ ラ イ シ ン グ intermediate を 検 out し た. Finally に (3) time の マ ル チ プ ル エ ク ソ ン ス キ ッ ピ ン グ と potential ス プ ラ イ also ス parts が に こ る "straight" abnormal ス プ ラ イ シ ン グ "も" mature mRNA ス プ ラ イ シ ン グ 仮 said "の 仮 say seaborne と し て そ の possibility が exam え ら れ る た め, そ の 検 line card を っ た results," straight "abnormal ス プ ラ イ シ ン グ" Born good に っ て じ る huge な cast げ 縄 shape RNA intermediate が no い こ と が Ming ら か と な っ た. Above three の different な る be 験 results か ら cancer で "mature mRNA ス プ ラ イ シ ン グ" が up き て い る matter を た 検 card out. し か し な が ら, こ の phenomenon は TSG101 posthumous son 伝 の み に お こ る special な も の な の で は な い か と い う critical が く send more せ ら れ て き た. そ れ に え answer, "mature mRNA ス プ ラ イ シ ン グ" phenomenon が, all kinds of cancer cells で common に き て し ま う こ と を shown す た め traces of TSG101 伝 child outside で with others な "mature mRNA ス プ ラ イ シ ン グ" phenomenon since が き る か を explore し た. そ の results, Fragile histidine triad (FHIT) heritage 伝, TP53BP2 heritage 伝 son に お い て も "mature mRNA ス プ ラ イ シ ン グ" phenomenon since が き る こ と を 発 see し た. Above の こ と か ら, cancer cells で "mature mRNA ス プ ラ イ シ ン グ" は common に up き る phenomenon で あ り, normal cells に は prepared わ っ て い る が cancer で は lost わ れ る mature mRNA が そ れ above ス プ ラ イ シ ン グ さ れ る こ と を inhibit す る よ う な institutions が す る こ と が さ ら に く and shown strong sucking さ れ た.

项目成果

Aberrant re-splicing of mature spliced mRNA : What is splicing-termination mechanism hidden?

成熟剪接 mRNA 的异常重新剪接：隐藏的剪接终止机制是什么？

• 发表时间: 2009
• 作者: 亀山俊樹;前田明
• 通讯作者: 前田明

成熟mRNAの異常再スプライシング現象:癌細胞で破綻しているスプライシング終了機構は何だろう?

成熟 mRNA 的异常重新剪接：癌细胞中被破坏的剪接终止机制是什么？

• 发表时间: 2009
• 作者: 亀山俊樹;前田明
• 通讯作者: 前田明

癌の発生と進行に関わるmRNA前駆体スプライシングの破綻

破坏参与癌症发生和进展的前体 mRNA 剪接

• 发表时间: 2010
• 期刊: 実験医学
• 作者: 亀山俊樹;前田明
• 通讯作者: 前田明

癌細胞における成熟mRNAの異常再スプライシング現象:その普遍性と重要性

癌细胞中成熟 mRNA 的异常重新剪接：其普遍性和重要性

• 发表时间: 2010
• 作者: 亀山俊樹;前田明
• 通讯作者: 前田明

Aberrant Re-Splicing of Matue Spliced mRNA : What Is Splicing-Termination Mechanism Hidden?

成熟剪接 mRNA 的异常重新剪接：隐藏的剪接终止机制是什么？

• 发表时间: 2010
• 作者: Toshiki Kameyama;Akila Mayeda
• 通讯作者: Akila Mayeda