新規抗体医薬品と革新的免疫染色法を用いたがん治療法の開発

使用新型抗体药物和创新免疫染色方法开发癌症治疗方法

• 批准号: 21659144
• 负责人: 権田 幸祐
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659144/
• 关键词: ナノ粒子; がん; 抗体医薬; 病理; 免疫染色; イメージング

抗体ベースの抗がん剤(抗体医薬品)は、近年大きな注目を集めており、市場規模は世界で約3兆円にまで拡大している。乳がんでは、ハーセプチン(抗HER2抗体)が抗体医薬品として使用されている。ハーセプチン投与の有無を決定するためには、がん組織のHER2発現量を免疫染色で調べるが、診断基準がわずか4段階にしか区分されておらず、高精度の的確な診断には至っていなかった。がんの最も脅威な点は転移能であるが、HER2発現性とがん転移性の間の相関性が不明瞭なため、がん転移により直結した分子を標的とした抗体医薬品開発が期待されていた。申請者はこれらの問題点を解決するために、(1)DAB等の酵素反応法ではなく、蛍光性ナノ粒子を標識剤に用いた超高精度な組織診断法を開発すること、(2)HER2以外の標的分子としてがん転移活性化因子PAR1(Protease-activated receptor 1)に注目し、抗HER2抗体と抗PAR1抗体を用いた統合的な組織診断法を開発すること、以上の2点を目的として研究を進めた。上記の目的を達成するために、蛍光性ナノ粒子である量子ドットに注目した。量子ドット(直径20nm)は長時間の安定なイメージングが可能であり、また粒子数と蛍光強度が比例関係にあるため、1粒子の蛍光強度から結合粒子数を見積もることができ、定量性の高いきめ細かい診断が可能となる。抗HER2抗体と抗PAR1抗体を精製し単量体化した後、抗体のヒンジ領域のSH基を利用して、量子ドットとの結合を行った。ヒトの乳がん病理組織に対して、それぞれの抗体結合量子ドットで標識を試みた。標識の際は、ブロッキング剤として、NH_4Cl、FBS、BSAなど様々なブロッキング剤を検討した。その結果、非特異的結合を出来るだけ回避し、抗体結合量子ドットを特異的に反応させることに成功し、病理組織中でそれぞれの抗体に結合した量子ドット1粒子の蛍光を高感度で捉えることに成功した。現在は、この粒子数を見積もることで、よりきめ細かい診断基準の作成を試みている。

Antibody ベ ー ス の resistance が ん tonic は medical 薬 product (antibody), in recent years, large き な attention を set め て お り は world, market scale で around &yen; 3 million に ま で company, big し て い る. Milk がんで る, ハ セプチ セプチ セプチ (anti-HER2 antibody)が antibody drug と て use されて る る. ハ ー セ プ チ ン cast and の presence of を decided す る た め に は, が ん organization の HER2 発 を immune dyeing で now quantity adjustable べ る が, diagnostic criteria が わ ず か 4 order に し か distinguish さ れ て お ら ず, high-precision の な diagnosis に は to っ て い な か っ た. が ん の most も threats wei な point は planning can move で あ る が, HER2 発 now と が ん planning phase shift between sexual の の masato sex が unknown な た め, が ん planning move に よ り straight knot し た molecular を mark と し た antibody medical 薬 product open 発 が expect さ れ て い た. Applicants は こ れ ら の problem point を す る た め に, DAB の enzymes such as (1) the 応 laws で は な く, 蛍 optical ナ ノ particle を logo tonic に い た ultra-high precision な tissue diagnosis を open 発 す る こ と, (2) the HER2 の target molecules と し て が ん planning to move activation factor PAR1 (Protease - activated に attention し, the HER2 receptor 1) antibody と PAR1 antibody を resistance with い た な tissue diagnosis method of integration of を open 発 す る こ と, 2 points above の を purpose と し を て research into め た. The purpose is to を achieve するために, 蛍 optical ナノ particles である quantum ドットに attention た た. Quantum ド ッ ト (20 nm in diameter) は の stability for a long time な イ メ ー ジ ン グ が may で あ り, ま た particle count と 蛍 light intensity が proportion masato is に あ る た め, 1 particle の 蛍 light intensity か ら combining particle count を see product も る こ と が で き, quantitative の high い き め fine か い diagnosis can と が な る. Resistance against HER2 antibody と PAR1 antibody を refined し 単 quantity body change し た, antibodies after の ヒ ン の SH base を ジ field using し て, quantum ド ッ ト と の combination line を っ た. Youdaoplaceholder0 breast がん pathological tissue に against <s:1> て and それぞれ <s:1> antibody-binding quantum ドットで marker を test みた. The event id の は, ブ ロ ッ キ ン グ tonic と し て, NH_4Cl, FBS, BSA な ど others 々 な ブ ロ ッ キ ン グ tonic を beg し 検 た. そ の results, the combination of nonspecific を る だ け avoid し, antibody combined with quantum ド ッ ト を specific に anti 応 さ せ る こ と に し success, pathological tissues で そ れ ぞ れ に の antibody combining し た quantum ド ッ ト 1 particle の 蛍 light を Gao Gan degrees で catch え る こ と に successful し た. Now, the <s:1> and <s:1> number of <s:1> particles を can be found in the product を る とで とで とで, よ <s:1> め め め. The detailed <s:1> <s:1> diagnostic criteria <e:1> are made into を test みて る る る.

项目成果

輸入リンパ管流入部検出方法及び特定細胞同定方法

传入淋巴管流入部位的检测方法及特定细胞的识别方法

• 发表时间: 2010

In Vivo Nano-imaging of Membrane Dynamics in Metastatic Tumor Cells Using Quantum Dots

• DOI: 10.1074/jbc.m109.075374
• 发表时间: 2010-01-22
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Gonda, Kohsuke;Watanabe, Tomonobu M.;Higuchi, Hideo
• 通讯作者: Higuchi, Hideo

Development of novel antibody-based therapeutic agents targeting cancer metastasis

开发针对癌症转移的新型抗体治疗剂

• 发表时间: 2009
• 作者: Gonda K;Miyashita M;Watanabe T.M.;Takeda M;Higuchi H;Ohuchi N
• 通讯作者: Ohuchi N

Nano-imaging of the lymph network structure with quantum dots

• DOI: 10.1088/0957-4484/21/18/185103
• 发表时间: 2010-05-07
• 期刊: NANOTECHNOLOGY
• 影响因子: 3.5
• 作者: Hikage, Makoto;Gonda, Kohsuke;Ohuchi, Noriaki
• 通讯作者: Ohuchi, Noriaki