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無血清線維芽細胞培養方法の確立

无血清成纤维细胞培养方法的建立

基本信息

批准号：
21659410
负责人：
寺師浩人
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、正常線維芽細胞の無血清条件下における培養方法の確立を目的としている。生体内において、線維芽細胞は増殖をほぼ止めた状態でコラーゲンを産生していることを考慮すると、培養条件においても増殖せず生存し続け、かつ機能している(コラーゲンを産生している)ことが重要と考えている。前年度において、DMEM培地と新しい線維芽細胞用培地であるHFDM-1培地における細胞増殖率と生存率を求めたところ、前者が培養14日目でほぼ死滅するのに対して、後者では35日目まで生存が可能であった。また、ELISAによる線維芽細胞のコラーゲン産生を測定では、前者が細胞のコラーゲン産生能がないのに対して、後者では、培養線維芽細胞がコラーゲンを産生していることが確認された。そこで、今年度においては、コラーゲンを産生しながら長期培養を可能とする培地条件を探求するべく、HFDM-1培地に必須脂肪酸とパルミチン酸添加の増殖率と生存期間延長効果をみて、加えて細胞膜脂肪酸解析を同時に行うこととした。その結果、最も生存率が高く、細胞膜の脂肪酸組成が正常の線維芽細胞に近い培地条件は、パルミチン酸、リノール酸、EPAを添加した群であることが判明した。現時点においては長期培養方法の確立には至らないが、短期無血清培養方法として今後の研究に役立てたい。

The aim of this study was to establish a culture method for normal line cells in serum-free medium. In vivo, the growth and development of embryonic cells are considered to be important in terms of culture conditions, survival and function. In the previous year, DMEM culture medium and new line culture medium were used to culture cells. In the HFDM-1 culture medium, the cell proliferation rate and survival rate were calculated. The former was cultured for 14 days, and the latter was cultured for 35 days. ELISA was used to determine the production of DNA in cultured cells. The former was used to determine the production of DNA in cultured cells. The latter was used to determine the production of DNA in cultured cells. The growth rate of essential fatty acids in the medium and long term culture was investigated. The results showed that the survival rate was high, the fatty acid composition of the cell membrane was normal, and the growth conditions of the cells were close to those of the normal cells. At present, the establishment of long-term culture method and short-term serum-free culture method shall be studied in the future.