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MPCポリマーを用いた間葉系幹細胞濃縮技術による再生組織の高性能化

利用MPC聚合物的间充质干细胞富集技术改善再生组织的性能

基本信息

批准号：
21659462
负责人：
星和人
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659462/
关键词：
間葉系幹細胞再生医療 MPCポリマー分化軟骨

项目摘要

本研究では、間葉系細胞の純化・濃縮による再生組織の特性向上を目的として、細胞接着阻害物質MPCポリマーを用いて細胞接着能の違いにより細胞を分取する培養プレート(MPCプレート)を作製し、接着性が高い間葉系細胞を選択的に回収して幹細胞特性の向上(SP細胞濃縮)を図る。最終年度である本年度では、1)MPCプレートで分離したMSCの増殖能、分化能の評価、2)MPCプレートによるSP分画濃縮の有用性検証、をおこなった。1)MPCプレートで分離したMSCの増殖能、分化能の評価、については、前年度の研究で選定されたMPCポリマー濃度5%のプレートを用いて、骨髄細胞を2500細胞/cm^2で播種して継代培養し、一継代10倍程度の良好の増殖を得た。また、多分化能に関しては、MPCプレートを用いて培養したP2,5の細胞と、MPCプレートを用いなかった対照群の細胞を比較検討したところ、MPCプレートで培養した細胞では、骨芽細胞系マーカーであるALPやRUNX2、軟骨細胞系マーカーではCOL2、COL1O、Sox9などの発現が上昇しており、MPCプレートにより、接着性が高い間葉系細胞を選択的に回収でき、幹細胞特性が向上していることが示唆された。2)MPCプレートによるSP分画濃縮の有用性検証、では、MPCプレートを用いて分離したMSCと対照細胞を用いて再生骨を作製した。ラット骨髄細胞をMPCポリマー濃度5%のプレートに播種して細胞を分離し、さらに、10%FBS含有培養液でP2まで継代培養し、人工骨とともにラットの背部に移植した。MPCプレートで分離したMSCを用いた再生骨は、対照細胞を用いて再生骨に比べ、組織学的にも生化学的(アウカリホスファターゼ活性)にも優れ、MPCプレートによる幹細胞特性の向上が検証された。

In this study, the purification and concentration of mesenchymal cells and the characteristics of regenerated tissues were studied. The cell adhesion inhibitor MPC was used to control the cell adhesion and the cell isolation culture process (MPC). The final year is: 1) Evaluation of MSC growth and differentiation ability; 2) Evaluation of SP concentration usefulness; 1) The MPC concentration was selected for the study in the previous year. The MPC concentration of 5% was used for the study. The osteoblasts were cultured at 2500 cells/cm^2. The good proliferation was obtained at a 10-fold level in one generation. The ability to differentiate and multiply is related to the growth of P2,5 cells and MPC cells in culture. The ability to differentiate and multiply is related to the growth of P2,5 cells in culture. The ability to differentiate and multiply is related to the growth of P2, MPC cells in culture. Stem cell characteristics are not shown. 2) The utility of MPC separation and purification is demonstrated by the use of MPC separation and MSC irradiation for bone regeneration. Bone marrow cells were cultured in a medium containing 5% FBS and then transplanted into the back. MPCs are used to isolate and regenerate bone, to irradiate cells, to regenerate bone, to histology, to biochemistry, and to optimize MPCs and stem cell characterization.