動的ゴーストイメージング技術を用いた高骨形成細胞集団の分取と機能的再生骨の実現

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採取直後のマウス骨髄細胞（未処理）、それを赤血球破砕処理したもの、さらにFicollにより単核球を分取したものについて、前年度の解析結果では、赤血球破砕処理したもので最も骨芽細胞分化能が高く、Ficollで単核球を分取したものにおいて最も低いという結果であった。この結果をさらに検証するために、細胞数をそろえて3群の細胞を播種し、骨芽細胞分化能を比較したが、やはり同様の結果であった。これは、骨芽細胞前駆細胞の基となる間葉系幹細胞はFicollによる単核球分取により濃縮され、骨形成が良好となるという予想に反するものであった。Ficollにより単核球を分取した群において骨芽細胞分化が低くなる理由については、1．Ficollによる単核球分取では間葉系幹細胞が濃縮されていると仮定していたが、実際は何らかの原因で濃縮されていない可能性、2．間葉系幹細胞以外の細胞が骨芽細胞分化を促進しており、Ficollによる分取でそれらの細胞が失われる可能性、が考えられた。そのため、まず上記1の仮説について、間葉系幹細胞マーカーであるCD90, CD105等の発現についてフローサイトメトリーでの検証を行った。しかし、採取直後の骨髄細胞は非常に雑多な集団であり、明らかな傾向がつかめなかった。そのため、多重染色による細胞集団の解析を開始している。また、ハイドロゲルについては、I型コラーゲンとII型コラーゲンの混和物についても検討を進めており、その混合割合を変えた際の細胞増殖能などについて解析を行った。