Investigation of structure and function of the COPI-System using single, on nanostructures immobilised molecules and fluorescence resonance energy transfer (FRET)

使用单个纳米结构固定分子和荧光共振能量转移 (FRET) 研究 COPI 系统的结构和功能

• 批准号: 5391865
• 负责人: Professor Dr. Felix Wilhelm Theodor Wieland
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Biotechnologie und Biophysik
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Priority Programmes
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2002-12-31 至 2004-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5391865?language=en
• 关键词: Investigation; structure; function; COPI; System

Ziel der interdisziplinären Projektinitiative ist die Aufklärung der Struktur-Funktions-Zusammenhänge einer Bio-Molekularen Maschine am Beispiel des Transportvesikels COPI. Das COPI-System ist ideal für die geplanten Untersuchungen geeignet, da sich das Coatomer für eine spezifische Markierung mit Donor- und Akzeptorfarbstoffen biochemisch in seine 7 Untereinheiten zerlegen und reversibel wieder zu einem funktionierenden Coatomer zusammenbauen läßt. Während der prinzipielle Mechanismus der COPI-Vesikel-Abschnürung im Detail aufgeklärt wurde, ist wenig zur Architektur und Dynamik der Struktur des Coatomers sowie zum Transportweg abgeschnürter Vesikel und dessen Steuerung in vivo bekannt. Zur Strukturaufklärung soll im beantragten Projekt der Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfer (FRET) auf Einzelmolekülebene (single-pair, spFRET) eingesetzt werden. Hierzu sollen verschiedene Kombinationen von Untereinheiten des Coatomer-Komplexes gezielt mit Farbstoffen markiert und aufgrund der bestimmten Donor/Akzeptor-Abstände ein 3D-Model des Coaotomer erstellt werden. Die Dynamik der intramolekularen Abstände und deren Veränderung bei Anbindung von Rezeptoren soll durch Experimente an einzelnen Coatomer-Molekülen, die auf einer Nanostruktur fixiert sind, mit einer Zeitauflösung im µs-ms Bereich aufgeklärt werden. Es soll die Richtungssteuerung durch das zeitaufgelöste Fluoreszenz-Imaging einzelner farbstoff- oder GFP-markierter COPI-Vesikel bzw. Coatomere in lebenden Zellen studiert und verstanden werden.

Ziel der interdisziplinären Projektinitiative ist die Aufklärung der Struktur-Funktions-Zusammenhänge einer Bio-Molekularen Maschine am Beispiel des Transportvesikels COPI. Das COPI-System is ideal für die geplanten Untersuchungen geeignet，da sich das Coatomer für eine spezierhe Markierung mit Donor- und Akzeptorfarbstoffen biochemisch in seine 7 Untereinheiten zerlegen und reversibel wieder zu einem funktionierenden Coatomer zusammenbauen läßt.如果详细了解COPI-Vesikel-Abschnürung的原理机制，则可以从Coatomers结构的建筑和动力学角度出发，从而实现体内运输。在单分子对共振能量转移（FRET）的结构研究中，我们采用了一种韦尔登方法。Hierzu sollen versedene Combinationen von Untereinheiten des Coatomer-Komplexes gezielt mit Farbstoffen markiert und aufgrund der bestimmten Donor/Akzeptor-Abstände ein 3D-Model des Coaotomer erstellt韦尔登.通过一种分子涂层的实验，将分子内动力学的吸收和吸收转化为固定的纳米结构，并在韦尔登上形成一个Zeitauflösung。这是因为我们的成像技术是通过GFP标记的COPI-Vesikel bzw来实现的。在生活中，泽伦学习和学习韦尔登。