权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ユニークな酵素活性発現の分子機構解析

独特酶活性表达的分子机制分析

基本信息

批准号：
21710220
负责人：
周哲敏
金额：
$ 3万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21710220/
关键词：
ニトリル代謝微生物酵素

项目摘要

(ニトリルを水和してアミドに変換する酵素)Nitrile hydratase(以下、NHase)の酵素活性発現機構解明から端を発した本研究は、"Self-Subunit Swapping"というタンパク質の新規な機能の発見につながったが、本現象は依然として未解明な部分が多い。本研究では、L-NHaseの活性発現化に関わる"Self-Subunit Swapping"において、"Self-Subunit Swapping"シャペロンとして働く複合体の機能および(全く未解明の酵素へのCoの取込みや、Coに配位するシステイン残基の酸化修飾を含め)活性発現機構の詳細を解明することを目的とした。NhIEタンパク質(以下、eタンパク質)と(Coイオンを含む)αサブユニットから構成される複合体αe_2(ホロαe_2)は、"Self-Subunit Swapping"を経由したアポ酵素の活性発現能力を持つことを本申請者らは極く最近同定した。しかし、どのようにしてホロαe_2が生成するかは未解明であった。(Coイオンを含まない)αサブユニットから構成される複合体αe_2(アポαe_2)をCoイオン存在下試験管内で混合ことでホロαe_2が生成することを発見し、さらに還元剤を添加するとホロαe_2の生成が促進されることを見いだした。次に、[eタンパク質]、[Coイオンを持たないαサブユニット]をそれぞれ単離・精製し、Coイオン存在下試験管内で混合し、ホロαe_2複合体形成実験を行った。複合体のCo含量・アポ酵素の活性発現能などの結果から、ホロαe_2複合体を形成にはeタンパク質が重要な役割を果たしていることを発見した。

Nitrile hydratase (hereinafter, NHase) enzyme activity mechanism is explained by this study, "Self-Subunit" Swapping "というタンパク性の新动な発见につながったが", this phenomenon is still unexplained and there are many parts of it. In this study, the activity of L-NHase was realized using "Self-Subunit Swapping" and "Self-Subunit" Swapping"シャペロンとして働く Complex の Function および(全く无码のzymeへのCoのGET込みや, Co-coordination acidification modification of the residue of Co-coordination and the active development mechanism are explained in detail and the purpose is explained in detail. NhIE Japanese material Toko constitutes Toko complex αe_2 (ホロαe_2)は, "Self-Subunit Swapping "を経 is based on the activity of the active enzyme and the ability to express it. The applicant of this application has recently decided to do it.しかし、どのようにしてホロαe_2がGenerationするかはUnresolvedであった. (Coイオンをcontaining まない)αサブユニットから constitutes the される complex αe_2 (アポαe_2)をCoイオン is mixed in the test tubeことでホロαe_2がGenerationすることを発见し、さらに return to the original 剤をAdd するとホロαe_2のGeneration がPromote されることを见いだした. Sub-に、[eタンパク性]、[Coイオンを志たないαサブユニット]をそれぞれ単里・In the presence of purified し and Co イオン, the mixed でし and ホロαe_2 complex was formed in the test tube. The Co content of the complex, the activity of the enzyme, the result of the active enzyme, and the αe_2 complex It's important to combine to form a good quality.