Die Replikationsgabel-Barriere im rDNA-Locus der Maus als Kontra-Helikase

Zil des Projektes ist，den Wirkmachismus der Replikationsgabelbarriere(RFB)in rDNA-Locus des Maus-Genome aufzuklären.我们对此进行了分析，并对其进行了定位和分析。4，6，7-Komplex duchgeführt，da diesem helikaseaktivität zugeschrieben wird，eine Aktuität，die Wire in eigen en vorversuen en Bestätigen konnten.本文报道了Insektenzellen Koexpriert，der Komplex gereinigt and Dessen Helikaseaktivität的MCM-Proteine的酶学分析。在此基础上，提出了一种新的理论和方法，并对其进行了分析。从现在开始，我们的工作就是保护自己，而不是从本质上来说。我们对此进行了研究，并对其进行了GC-Reiche DNA-Sequenz序列分析。这是一种新的技术，它的基本要素是蛋白质和蛋白质的相互作用以及蛋白质的复制。Ein weiteres Ziel ist die Anwendung eines Systems zur稳定von siRNA，um Effekte eines eines Protein-Ton TTFI auf das Ausmaüvon Replikation and Replikation在体内检测von siRNA和复制。

Ziel des Projektes ist, den Wirkmechanismus der Replikationsgabelbarriere (RFB) im rDNA-Locus des Maus-Genoms aufzuklären. Es soll im Rahmen dieses Projektes analysiert werden, ob Wirtszell-Helikasen durch TTFI orientierungsspezifisch inhibiert werden. Deshalb sollen Untersuchungen mit einem murinen MCM4,6,7-Komplex durchgeführt werden, da diesem Helikaseaktivität zugeschrieben wird, eine Aktivität, die wir in eigenen Vorversuchen bestätigen konnten. Hierfür sollen die drei MCM-Proteine in Insektenzellen koexprimiert, der Komplex gereinigt und dessen Helikaseaktivität enzymologisch analysiert werden. Der Einfluss von Einzelstrang-Bindungsproteinen auf die Helikaseaktivität des MCM-Komplexes und auf die Kontrahelikaseaktivität der RFB soll untersucht werden. Außerdem beabsichtigen wir, diejenigen Proteindomänen von TTFI zu bestimmen, die für die Kontrahelikaseaktivität essentiell sind. Es soll untersucht werden, ob und wenn ja wodurch eine GC-reiche DNA-Sequenz, die benachbart zur TTFI-Bindungssequenz liegt, die Kontrahelikaseaktivität beeinflusst. Um die molekulare Wirkungsweise von TTFI als Kontrahelikase und RFB-Konstituente verstehen zu lernen, soll untersucht werden, welche zellulären Replikationsproteine mit TTFI interagieren und welche Proteindomänen von TTFI für diese Wechselwirkungen essentiell sind. Ein weiteres Ziel ist die Anwendung eines Systems zur stabilen konditionalen Expression von siRNA, um Effekte eines Protein-Knock-down von TTFI auf das Ausmaß von Replikation und Replikationstermination in vivo untersuchen zu können.