Analyse der spatialen und temporalen Interaktionen des murinen ORC-Komplexes

小鼠 ORC 复合体的空间和时间相互作用分析

• 批准号: 5319544
• 负责人: Professor Dr. Friedrich Grummt (†)
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Biochemie I
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2000-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5319544?language=en
• 关键词: Analyse; der; spatialen; und; temporalen

Unser langfristiges Ziel ist es, die Rolle des murinen "origin recognition complex" (ORC) bei der Replikationsinitiation aufzuklären. Folgende Aspekte sollen bearbeitet werden: 1) Mit genetischen und biochemischen Verfahren sollen Protein-ProteinInteraktionen im ORC-Komplex von einzelnen ORC-Untereinheiten miteinander und von diesen ORC-Proteinen mit anderen Replikationsproteinen in vitro und in vivo untersucht werden. (2) Protein-Protein-Interaktionen am ORC und im gesamten präreplikativen Komplex sollen mit der Methode des Lumineszenz-Resonanz-Energie-Transfers (LRET) sowohl in vitro, also auch in lebenden Zellen in "real time" gemessen werden. (3) Sequenzspezifische ORC-Orgin-DNA-Interaktionen sollen durch Gelretardation, Immunpräzipitation sowie CHIP- und Footprint-Analyse aufgeklärt werden. (4) Es sollen alle sechs rekombinanten ORCUntereinheitsproteine gemeinsam in Insektenzellen exprimiert, der hexamere Komplex nativ rekonstituiert, gereinigt und analysiert werden. Wir erwarten, daß diese Untersuchungen zur Erarbeitung einer weitgehend vollständigen spatialen und temporären "Assembly-Map" des gesamten präreplikativen Komplexes führen werden und darüberhinaus wichtige Einblicke in biologische Funktion der ORC-Untereinheiten und ORC-assoziierten Initiatorproteine erlauben.

Unser langfristiges Ziel ist es, die Rolle des murinen “起源识别复合体” (ORC) bei der Replikationsinitiation aufzuklären。请注意以下问题： 1) 遗传学和生物化学分析中的蛋白质-蛋白质相互作用在 ORC-Komplex 中 ORC-Untereinheiten miteinander 和 von diesen ORC-Proteinen mit anderen Replikations Proteinen in IV 和 in vivo 韦尔登下。 (2) 蛋白质-蛋白质-相互作用在 ORC 和 gesamten präreplikativen Komplex sollen mit der Methode des Lumineszenz-Resonanz-Energie-Transfers (LRET) sowohl in 体外，也在“实时”gemessen werden 的 lebenden Zellen 中。 (3) Sequenzspezifische ORC-Orgin-DNA-Interaktionen sollen durch Gelretardation, Immunpräzipitation sowie CHIP- and Footprint-Analyse aufgeklärt werden. (4) 在 Insektenzellen exprimiert、der hexamere Komplex nativ rekonstituiert、gereinigt 和 analysiert werden 中，所有这些重组的 ORCUntereinheits Proteine gemeinsam。 Wir erwarten, daß diese Untersuchungen zur Erarbeitung einer weitgehend vollständigen spaceen und temporären “Assembly-Map” des gesamten präreplikativen Komplexes führen werden and darüberhinaus wichtige Einblicke in Biologische Funktion der ORC-Untereinheiten und ORC-关联启动蛋白erlauben。