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セロミクスを応用した神経芽腫の分化関連因子の解析と治療法開発

使用细胞组学分析与神经母细胞瘤分化和治疗开发相关的因素

基本信息

批准号：
22791709
负责人：
亀井尚美
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

神経芽腫の予後良好腫瘍と予後不良腫瘍の網羅的遺伝子発現の比較解析から前者で発現が有意に高かった3遺伝子の遺伝子産物抗体を用いて、約300腫瘍を前者由来の腫瘍細胞(分化遅延細胞)、化学療法抵抗性で高頻度に再発する後者の腫瘍細胞(分化逸脱細胞)を分別した。さらに、神経芽腫細胞株9株にこの3遺伝子を導入し、細胞の増殖能や分化形態を観察したところ、細胞増殖が抑制され、一部に分化傾向を認めた。定量RT-PCR法による導入後の各遺伝子発現から、遺伝子導入効率に差が認められ、効率に準じて増殖抑制が起きていた。一方で、この3遺伝子のsiRNAを3種作成し、細胞株9株および腫瘍から得た初代培養細胞5検体に導入して細胞形態の変化を検討した。その結果、定量RT-PCRでは48時間迄は有意に遺伝子発現が抑制され、一部を除きsiRNA投与後48時間で有意に増殖が促進した。同様に、広島大学で開発した「一細胞解析:セロミクス」(一細胞の細胞内液のMS解析システム)にて6時間ごとに細胞内液を採取し、代謝産物の網羅的解析を行った。その結果、スフィンゴミエリンやチューブリン等神経細胞骨格に関わる蛋白とさらに神経伝達物質に関わるGA8Aやタウリンが後者で抑制されていた。また、これらの細胞の一細胞解析データを、total RNAを用いて、マイクロアレイ解析を行った結果と照合して、3遺伝子導入やその抑制によるパスウェイについて探索を行った。その結果、グルタミン酸の代謝パスウェイが関与しており、グルタミン酸脱水素酵素の変化が、これら細胞の分化誘導に関連しており、これらの悪性度を規定している可能性が示された。故に、この酵素が有用なバイオマーカーと考えられ、この酵素測定や誘導剤の開発が診断および治療開発に結びつく可能性が示唆された。

After god 経 buds swell の to good swollen sores と to bad after swollen sores の snare the legacy of 伝発の now comparing analytic から former で発が now interested in high にかった 3 heritage 伝 son の heritage 伝 zi chan antibody を content with いて, about 300 swollen sores を former origin の swollen sores cells 遅 delay cells (differentiation), chemotherapy resistance で high frequency に発する latter の swollen sores cells (ease off cells) Youdaoplaceholder0 respectively represents た. さらに, god 経 buds swell cell lines 9 strains にこの 3 heritage 伝を import し, cells can やの raised colonization form を観 examine したところが inhibition, cell rights colonization され, a に differentiation tendency をめた. Quantitative rt-pcr method による after import の each legacy 伝 son 発 now から, but 伝 import poor working rate にが recognize められ, sharper rate に quasi じて raised colonization inhibitory がきていた. で, この 3 heritage 伝 son の siRNA を three make し, cell line 9 strains および swollen sores から have た original culture cell 5 検 body に import しての cells form - the を beg し検た. その result, quantitative rt-pcr では 48 time effect は intentionally に heritage 伝 son 発 now が inhibit され, a を except き siRNA cast time and after 48 で intentionally に raised colonization が promote した. With others in に, hiroo island university で発した "analytic: a cell セロミクス" (fluid inside a cell のの MS analytical システム) にて 6 time ごとに intracellular fluid を take しの snare, metabolites of analytical line をった. その results, スフィンゴミエリンやチューブリン god 経 cells such as bone に masato わる protein とさらに god 経伝 of material に masato わる GA8A やタウリンが latter で inhibit されていた. また, これらの cells の a parsing データを, total RNA をいて, マイクロアレイ parsing line をった result と according して, 3 but 伝 import やその inhibit によるパスウェイについて exploration line をった. その results, グルタミのン acid metabolism パスウェイが masato and しており, グルタミン acid dehydration vegetable enzyme の - が, これのら cell differentiation induced に masato even しており, これらの悪 sex degrees を rules していがる possibility in された. So the に, この enzyme が useful なバイオマーカーと exam えられ, この enzyme determination や induced tonic の open 発が diagnosis および treatment open 発に knot びつく possibility が sucking in された.