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テルペノイドのコンビナトリアルバイオケミストリーと微細藻類における合成生物学

微藻中萜类化合物的组合生物化学和合成生物学

基本信息

批准号：
11J00741
负责人：
池澤信博
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

1.「テルペノイドのコンビナトリアルバイオケミストリー」について…コドン最適化した4種類のセスキテルペン合成酵素と、タバコcDNA由来5-epi-aristolochene合成酵素をそれぞれFPP高生産性改変酵母中で発現して、目的のセスキテルペン生成を確認した。これらのセスキテルペン合成酵素と、セスキテルペン生合成系に関わる6種類のシトクロムP450(Germacrene A oxidase、Costunolide synthase、GAA-8β-hydroxylase、5-epi-Aristolochene hydroxylase、Premnaspirodiene oxygenase、(+)。δ-Cadilene-8-hydroxylase)を組み合わせることとした。まず、5-eρi・・aristolochene合成酵素、vetispiradiene合成酵素について、(+)-δ-Cadinene-8-hydroxylaseを除く5種のシトクロムP450と組み合わせ、2×5種類の計10クローンを作出した。2.「微細藻類における合成生物学」について…クラミドモナス葉緑体内でamorpha-4,11-dieneを生成させるべく、クラミドモナス葉緑体にコドン最適化した鳥類FPP合成酵素(FPPS)遺伝子、amorpha-4,11。diene合成酵素(ADS)遺伝子を合成依頼し、パーティクルガン法によりクラミドモナス葉緑体に導入を試みた。形質転換には光合成能欠損株を用い、遺伝子導入による光合成活性の回復による選抜をおこなった。その後、12クローンについてコロニーPCRをおこなった結果、どのクローンもホモプラズミックではなかった。しかしながら、5クローンにおいてADSの導入が確認され、さらに、ADS導入確認株5クローンのうち3クローンについてFPPSの導入も確認できた。

1. "I don't know what's going on," she said. The most efficient way to synthesize enzymes, the origin of cDNA synthesis enzymes, the production of 5-epi-aristolochene synthesis enzymes, the production of high-quality yeast FPP, and the generation of confirmation enzymes in yeast. The synthetic enzymes and enzymes were isolated and synthesized. The P450 (Germacrene An oxidase, Costunolide synthase, GAA-8 β-hydroxylase, 5-epi-Aristolochene hydroxylase, Premnaspirodiene oxygenase, (+)) were synthesized in the same category. δ-Cadilene-8-hydroxylase) is a combination of high performance and low temperature. Aristolochene synthetic enzyme, 5mure ρ I aristolochene synthetic enzyme, vetispiradiene synthetic enzyme, (+)-δ-Cadinene-8-hydroxylase, P450, P450, 2 × 5, P450, P450, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5, 5 2. The synthetic biology of microalgae. In vivo, amorpha-4,11-diene is used to produce the most efficient FPP synthesis enzyme (FPPS) gene, amorpha-4,11, which is the most efficient enzyme in vivo. Diene synthase (ADS) was synthesized in accordance with the method of enzyme synthesis (ADS). The photosynthetic capacity of the plant is lower than that of the plant, and the photosynthetic activity of the plant is low. After that, 12 minutes later, you will need to know the results of the PCR test results. Please check that ADS, ADS, FPPS, and so on, enter the confirmation button.