植物油を用いて養殖可能な脂肪酸代謝酵素遺伝子導入海産魚系統の作出

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今年度は、ヤマメ鎖長延長酵素2遺伝子導入ニベ系統の稚魚期の魚を用いてDHA欠乏餌料による給餌試験を行った。その結果、この系統の稚魚は餌中にDHAが含まれていないと正常に発育しないことが明らかとなった。この結果に合わせて、ニベ内在性の不飽和化酵素が遺伝子導入魚で増加していたTPAをDHAの前駆物質であるTHAに代謝できないこと、また、TPAを主に代謝可能な脂肪酸代謝酵素が見つかっていないことからも、増加したTPAをDHAへと代謝させることは困難であることが考えられた。そこで、本年度はΔ4活性を保持する不飽和化酵素に着目した。Δ4不飽和化酵素はTPAと同じく遺伝子導入魚で増加していたDPAを直接DHAへと転換可能である酵素で、この酵素を用いればTPAおよびTHAを介さずにDHAを効率的に合成させることが可能になると考えられる。Δ4不飽和化酵素は近年、植物食性魚のシモフリアイゴから単離されている。そこで、この情報を元に近縁種であるアイゴから不飽和化酵素遺伝子を単離した。単離した酵素の活性を酵母発現系を用いて解析した。その結果、この酵素もシモフリアイゴの酵素と同様にΔ4活性を保持していることが明らかとなった。この遺伝子と発現量の異なる肝臓発現プロモーター3種を組み合わせたコンストラクトを作製し、ニベ受精卵へのマイクロインジェクションを行った。現在は、得られた雄親魚から得られた精液よりゲノムDNAを鋳型として、アイゴの遺伝子特異的プライマーを用いたPCRによりスクリーニング作業を行っている。最終年度にあたり、前年度までに得られていた成果をオーストラリア・ブリスベンにて行われた10th International Marine Biotechnology Conferenceにて口頭発表し、さらに投稿論文としてまとめたものをJournal of Biotechnology誌に公表した。