蛋白質リジンメチル化のプロテオミクス解析システムの確立

蛋白质赖氨酸甲基化蛋白质组学分析体系的建立

• 批准号: 22651073
• 负责人: 眞貝 洋一
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22651073/
• 关键词: タンパク質翻訳後修飾; リジンメチル化; プロテオミクス; 抗体

当初以下の3つの項目の研究を計画した。1. 「メチル化リジン」を認識するモノクロナール抗体の作成とその特性の検定2. 「メチル化リジン」を認識するモノクロナール抗体を用いた新たなリジンメチル化基質の同定3. リジンメチル化プロテオーム解析の検討H22年度中に、2までに関して成果を得た。1. メチル化リジンを特異的に認識するプローブとして、特異性の異なる抗メチル化リジン抗体を複数作成し、その応用性を検討した。2. 得られた抗メチル化リジン抗体を用いて、免疫沈降ならびに質量分析により、新たなリジンメチル化を受ける蛋白質が同定可能か、検討した。具体的には、まず、既にリジンメチル化修飾の存在が明らかとなっているタンパク質EFla1をモデルとして、1.で得られたメチル化リジン特異的抗体による免疫沈降が可能か、検討した。その結果、EFla1のメチル化部位である55番目のリジン残基をアルギニンに置換したK55Aと町のEFla1を293T細胞に過剰発現し、その細胞抽出液を用いた免疫沈降実験を行った。結果、特異抗体はK55AよりもwtのEFla1を有意に免疫沈降できることが明らかとなった。次に、この抗体をクロスリンクしたマグネットビーズを用いて293T細胞の細胞抽出液から免疫沈降を行った。得られた免疫沈降物の質量分析を行ったところ、複数の分子が、抗メチル化リジン抗体特異的に免疫沈降されてくること、その中にEFla1も含まれていること、いくつかの分子に関してはリジン残基のメチル化修飾の可能性が示唆された。現在、新たに検出された新規リジンメチル化候補分子に関して、さらなる検証を行っている。

At the beginning, the following "3" projects studied the "project project". 1. Make sure that the antibody is made into a specific property. 2. The antibody is not specific to the antibody. In the middle of the year H22, 2 years later, the results were obtained. 1. It is necessary to know that the antibodies are multiplicative, and that the sex is different. two。 The antibody was detected by immunoassay, immunoassay, quantitative analysis, immunoassay, immunoassay and immunoassay. There is a clear indication that the specific information is available, that is, the specific information, the specific information, the It is possible to immunize the specific antibodies. According to the results of the experiment, the EFla1 fragments were detected in the EFla1 293T cell of the K55A locus, and the cell extract was used to immunize the vaccine. The results showed that the specific antibody K55A