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放射性同位体を全く使用しない水系従属栄養バクテリアの2次生産測定法の確立

不使用任何放射性同位素的水性异养细菌二次生产测量方法的建立

基本信息

批准号：
22710019
负责人：
川崎伸之
金额：
$ 2.33万
依托单位：
National Institute for Environmental Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22710019/
关键词：
バクテリア 2次生産溶存有機物ブロモデオキシウリジン

项目摘要

現存のバクテリアの2次生産測定は、放射性同位体を用いた手法が使われているため我が国では放射同位体の使用が制限されており、バクテリアの2次生産はその重要性にもかかわらずほとんど報告例がないのが現状である。1990年代にチミジンの類似物質であるブロモデオキシウリジン(BrdU)を使用する手法が確立されたが、それでも現存の方法は、蛍光標識したBrdUの蛍光強度を濃度に変換する時に放射性同位体で標識されたBrdUが必要とされている。そのため本研究では、BrdUの蛍光を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)の蛍光検出器を用いて測定する方法の開発を試みた。また従来法との比較のため、霞ヶ浦湖水を用いた培養実験を行い、バクテリアの2次生産の測定を行った。今年度は、HPLC-MS分析器の精度を高めるためBrdUの代わりに安定同位体を含むアデノシンを用いてバクテリアの2次生産を測定する方法を目指した。アデノシンを使う理由についてであるが、BrdUに比べてアデノシンがはるかにイオン化しやすく、HPLC-MS分析器での測定に向いている物質であると考えられるためである。試薬である15Nデオキシアデノシンを入手し、バクテリアに取り込ませる実験を行い、取り込ませた15Nデオキシアデノシンの抽出並びに単離、そしてHPLC-MS分析器での最適測定条件の検討を行った。測定条件の検討を様々行った結果、現存法よりも感度も精度も高い放射性同位体を全く使用しないバクテリアの2次生産測定法確立の可能性が示唆され、今後の実用化への目途を立てる事ができた。

The existing methods for determining the use of radioisotopes in secondary production are used to limit the use of radioisotopes in China. In the 1990s, the use of radioisotope (BrdU) methods was established, and existing methods were used to identify the radioisotope (BrdU) when the concentration of BrdU was changed. In this study, the development of a method for the determination of BrdU in high speed liquid chromatography (HPLC) was studied. The method of comparison and the method of determination of secondary production in Xiapu Lake This year, HPLC-MS analyzer accuracy is high, BrdU generation is stable, isotope is stable, and the method of secondary production is pointed out. For example, if you want to use the HPLC-MS analyzer, you can use the HPLC-MS analyzer. To explore the optimal conditions for HPLC-MS analyzers, we try to extract 15N samples from the sample and select the best conditions. The results of the study of the measurement conditions, the existing methods, the sensitivity, the accuracy and the feasibility of establishing the secondary production method for radioactive isotopes are all used. The future application of the method is also discussed.