Studies on the enzyme that catalyzes D/L-isomerization of an amino acid during the post-translational modification of neuropeptide precursor.

研究神经肽前体翻译后修饰过程中催化氨基酸 D/L 异构化的酶。

• 批准号: 23570094
• 负责人: MORISHITA Fumihiro
• 金额: $ 3.49万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23570094/
• 关键词: 神経科学; 生理活性物質; 細胞培養; 遺伝子導入; アメフラシ; 神経ペプチド; D型アミノ酸; 翻訳後修飾; サブトラクション; 分子生物学

NdWFamide (NdWFa) is a D-amino acid containing neuropeptide of the marine gastropod, Aplysia kurodai. In this study, we attempt to identify the peptidyl D/L-isomerase (PI) that catalyzes the D-/L-conversion of NdWFa in Aplysia. To this end, we prepared NdWFa-expressing neuron specific cDNAs by the subtraction method. When the cDNAs were cloned and sequenced, we found that several predicted proteins with N-terminal signal peptide could not be specified their functions by homology search on database. We currently assume that those proteins are candidates for the PI of Aplysia.Then, we tried to establish NdWFa-expressing cell-line, because such cells could be used for the bioassay system for the candidate genes of the PI. Transformation of NdWFa-precursor gene to CHO-K1 cell seems to be successful. However, biosynthesis of the peptide could not be confirmed, so far. We may need fine-tuning of experimental conditions that leads to more effective expression of foreign gene.

NdWFamide（NdWFa）是海洋腹足类黑腹蛛（Aesthesiakurodai）的一种含D-氨基酸的神经肽。 在这项研究中，我们试图确定肽基D/L-异构酶（PI），催化的D-/L-转换的NdWFa在Astrasia。 为此，我们通过减法制备了表达NdWFa的神经元特异性cDNA。 在克隆和测序的过程中，我们发现有几个预测的N端有信号肽的蛋白不能通过数据库中的同源性搜索来确定其功能。 我们目前认为这些蛋白质是拟南芥PI的候选基因，因此我们试图建立表达NdWFa的细胞系，因为这样的细胞可以用于PI候选基因的生物测定系统。 NdWFa-前体基因转化CHO-K1细胞似乎是成功的。 然而，到目前为止，还不能证实肽的生物合成。 我们可能需要对实验条件进行微调，以使外源基因更有效地表达。

项目成果

軟体動物の神経ペプチドをD型化する酵素の探索(予備的報告)

寻找一种将软体动物神经肽转化为D型的酶（初步报告）

• 发表时间: 2012
• 作者: Morishita Fumihiro;Furukawa Yasuo;Matushima Osamu;森下文浩
• 通讯作者: 森下文浩

軟体動物の神経ペプチドをD型化する酵素の探索（予備的報告）

寻找一种将软体动物神经肽转化为D型的酶（初步报告）

• 发表时间: 2012
• 作者: Morishita Fumihiro;Furukawa Yasuo;Matushima Osamu;森下文浩;森下文浩
• 通讯作者: 森下文浩

アメフラシのD型アミノ酸含有神経ペプチド、NdWFamide

海兔 D 型含氨基酸神经肽，NdWFamide

• 发表时间: 2011
• 期刊: 比較生理生化学
• 作者: 森下文浩;古川康雄;松島 治
• 通讯作者: 松島 治

Molecular cloning of two distinct precursor of NdWFamide, D-tryptophan-containing neuropeptide of the sea hare, Aplysia kurodai

海兔含 D-色氨酸神经肽 NdWFamide 的两个不同前体的分子克隆

• 发表时间: 2012
• 期刊: Peptides
• 影响因子: 3
• 作者: Morishita Fumihiro;Furukawa Yasuo;Matsushima Osamu
• 通讯作者: Matsushima Osamu

アメフラシのD型トリプトファン含有神経ペプチド(NdWFamide)の前駆体遺伝子クローニングと発現

海兔D型色氨酸神经肽(NdWFamide)前体基因的克隆与表达

• 发表时间: 2013
• 作者: 森下文浩;古川康雄;松島治
• 通讯作者: 松島治