Structural analysis of uncharacterized enzymes acting on glycans and its application to the production of oligosaccharides

作用于聚糖的未表征酶的结构分析及其在寡糖生产中的应用

• 批准号: 23570132
• 负责人: TONOZUKA Takashi
• 金额: $ 3.41万
• 依托单位: Tokyo University of Agriculture and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23570132/
• 关键词: 酵素; 糖; 糖質加水分解酵素; グリコシンターゼ; 糖タンパク質糖鎖; X線結晶構造解析; グルコシダーゼ; 糖質加水分解酵素ファミリー63; オリゴ糖; Ｘ線結晶構造解析; マンノシダーゼ

This study focuses on bacterial enzymes homologous to processing alpha-glucosidases I and II, both of which hydrolyze eukaryotic glycans. An enzyme from E. coli, YgjK, was successfully converted into a glycosynthase, and the enzyme efficiently produced Glc-alpha-1,2-Gal. The result suggests that the natural substrates of YgjK are likely to be sugars containing the Glc-alpha-1,2-Gal structure. We also studied related enzymes from Thermus and other bacterial species. This study shows that a combination of protein crystallography and glycosynthase reaction allows us to determine the natural substrates of carbohydrate-active enzymes, even if the substrates are not commercially available.

这项研究的重点是与加工α-葡萄糖苷酶I和II同源的细菌酶，这两种酶都能水解真核糖链。从大肠杆菌YgjK出发，成功地将其转化为糖合酶，该酶能高效地产生Glc-α-1，2-Gal。结果表明，YgjK的天然底物可能是含有GLC-α-1，2-Gal结构的糖。我们还研究了来自Thermus和其他细菌物种的相关酶。这项研究表明，结合蛋白质结晶学和糖合成酶反应，我们可以确定碳水化合物活性酶的天然底物，即使底物没有商业用途。

项目成果

Structure of a bacterial glycoside hydrolase family 63 enzyme in complex with its glycosynthase product, and insights into the substrate specificity.

细菌糖苷水解酶家族 63 与其糖合酶产物复合的结构，以及对底物特异性的深入了解。

• DOI: 10.1111/febs.12424
• 发表时间: 2013
• 期刊: FEBS Journal
• 影响因子: 5.4
• 作者: Takatsugu Miyazaki;Megumi Ichikawa;Gaku Yokoi;Motomitsu Kitaoka;Haruhide Mori;Yoshikazu Kitano;Atsushi Nishikawa and Takashi Tonozuka
• 通讯作者: Atsushi Nishikawa and Takashi Tonozuka

GH63に属するグルコシダーゼの構造と基質特異性に関する新しい知見

关于 GH63 葡萄糖苷酶的结构和底物特异性的新发现

• 发表时间: 2013
• 期刊: 応用糖質科学
• 作者: 宮崎剛亜;西河淳;殿塚隆史
• 通讯作者: 殿塚隆史

Shewanella amazonensis由来 GH99エンド -α-マンノシダーゼの基質特異性の解析

亚马逊希瓦氏菌 GH99 内切 α-甘露糖苷酶的底物特异性分析

• 作者: 市川めぐみ;松田佳奈;宮崎剛亜;飯野健太;松尾一郎;西河淳;殿塚隆史
• 通讯作者: 殿塚隆史

Arthrobacter globiformis T-6 由来イソマルトデキストラナーゼのX 線結晶構造解析

球状节杆菌 T-6 异麦芽糖葡聚糖酶的 X 射线晶体结构分析

• 发表时间: 2013
• 作者: 岡沢唯香;横井岳;宮崎剛亜;西河淳;殿塚隆史
• 通讯作者: 殿塚隆史

Heterologous expression and characterization of processing α-glucosidase I from Aspergillus brasiliensis ATCC 9642

• DOI: 10.1007/s10719-011-9356-z
• 发表时间: 2011-12-01
• 期刊: GLYCOCONJUGATE JOURNAL
• 影响因子: 3
• 作者: Miyazaki, Takatsugu;Matsumoto, Yuji;Tonozuka, Takashi
• 通讯作者: Tonozuka, Takashi