Modification of rattle snake venom derived blood clot dissolver, Alfimeprase, by fusion with C-terminal domain of habu-HR1a and fibrin-targeting peptide

通过与 habu-HR1a 的 C 端结构域和纤维蛋白靶向肽融合，对响尾蛇毒液衍生的血栓溶解剂 Alfimeprase 进行修饰

• 批准号: 23590199
• 负责人: ISHIDA Isao
• 金额: $ 3.41万
• 依托单位: Teikyo Heisei University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23590199/
• 关键词: バイオテクノロジー; タンパク質; 酵素; 血栓溶解剤; フィブリン分解活性; 遺伝子組み換えタンパク質; 組換えDNA; フィブリン分解; 遺伝子組み換え

Alfimeprase(A) can digest fibrin directly, and do not produce any plasmin in different from tPA (Activase). Because A can be rapidly trapped by alpha-2 macroglobulin (alfpha-2M) and inactivated in the blood vein, the clinical effect of A in the phase 2 has not been so good to advance its development. We designed the gene in which the C-terminal side of the A was fused with the C-terminal domain (collagen-binding domain) of the HR1a. Considering targeting to fibrin clots, the C-terminal side of the AH gene was fused with the gene for the human plasminogen-derived kringle domain 1 region, which fusion protein is called AHP. The A, AH and AHP genes were inserted into the pE-SUMO vectors and were expressed in the E.coli BL21(DE3)star. Fusion of the HR1a C-teriminal domain with A did not have any effect in terms of avoiding of inactivation by alpha-2M regardless of the presence or absence of the N-terminal SUMO-peptide.

Alfimeprase(A)能直接消化纤维蛋白，不产生任何与tPA(激活酶)不同的纤溶酶。由于A可以被α-2巨球蛋白(α-2M)迅速捕获并在血液中灭活，因此A在2期的临床效果并不是很好，不能促进其发展。我们设计了A的C末端与HR1a的C末端结构域(胶原结合域)融合的基因。考虑到以纤维蛋白凝块为靶点，AH基因的C末端与人纤溶酶原Kringle结构域1区域的基因融合，融合蛋白被称为AHP。将A、AH和AHP基因插入pE-SUMO载体，在大肠杆菌BL21(DE3)STAR中表达。将HR1a C-三端结构域与A融合，在避免α-2M灭活方面没有任何效果，无论有没有N-末端SUMO-肽。

项目成果

Generation of TRAIL-receptor 1-specific human monoclonal antibodies by a combination of immunospot array assay on a chip and human Ab-producing mice

通过芯片上的免疫点阵列测定和产生人抗体的小鼠相结合来产生 TRAIL 受体 1 特异性人单克隆抗体

• 发表时间: 2010
• 期刊: Eur. J. Immunol
• 作者: Jin A;Ozawa T;Tajiri K;Lin Z;Obata T;Ishida I;Kishi H and Muraguchi A
• 通讯作者: Kishi H and Muraguchi A

非水溶性フラーレン及び水溶性フラーレンの薬物に対する相互作用の検討

水不溶性和水溶性富勒烯的药物相互作用的检查

• 发表时间: 2011
• 作者: 小島 祐子;富田 潤;池田 佳子;関野 浩一;中川 沙織;大和 進;油布朋子
• 通讯作者: 油布朋子

嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発ー細胞・分子レベルでの解析

利用厌氧菌作为药物输送载体开发实体癌新治疗方法——细胞和分子水平分析

• 作者: 西川毅;石田功他
• 通讯作者: 石田功他

嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発---in vivo レベルでの解析

以厌氧菌为药物输送载体开发实体瘤治疗新方法——体内水平分析

• 作者: 平裕一郎;平郁子;大野まき;西川毅;磯田勝広;池本守;斎藤浩美;石田功
• 通讯作者: 石田功

嫌気性菌をドラッグデリバリー担体に用いた固形がんに対する新規治療法の開発---細胞・分子レベルでの解析

以厌氧菌为药物递送载体开发实体癌治疗新方法——细胞分子水平分析

• 作者: 西川毅;平裕一郎;平郁子;大野まき;磯田勝広;池本守;斎藤浩美;石田功
• 通讯作者: 石田功