胸腺特異的タンパク質分解メカニズムによる免疫制御機構の解明

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本研究課題は胸腺皮質上皮細胞で特異的に発現する特殊なプロテアソームの機能の解析とそれによって作り出されるペプチドと胸腺細胞のポジティブセレクションとの関係性を解明することを目的とした。これまでの研究結果から、胸腺プロテアソームはこれまで知られている恒常的及び免疫プロテアソームとは異なる基質分解能を保持していることを明らかにしている。T細胞受容体とMHCの相互作用に胸腺プロテアソーム由来のペプチドがどのように影響しているかを生化学的(タンパクレベル)かつ免疫学的(マウス個体レベル)に明らかにする必要がある。本年度は、必要となる実験手法を習得することを焦点において研究を行った。昆虫細胞や大腸菌を用いたTCRおよびMHCの効率的タンパク質発現法を習得し、これにより両者のタンパク質の相互作用を評価できる。現在はBiacoreを用いた解析を中心に行っている。また、特定T細胞受容体をもつT細胞hybridomaの作出やTCRシグナルのレポーター配列を利用した抗原反応性の評価も行った。これらの結果は細胞レベルでペプチドのTCR-MHC相互作用に対する役割を証明するために多いに役立つものと考えている。さらに、マウスでペプチドの影響を調べるための実験手法の考案および試行を行った。手法としてはex vivo胸腺培養時のペプチドの添加によりT細胞分化状態を解析することが最も簡易であるが、これまでの結果から、この手法からcognateな抗原以外のペプチドのT細胞への影響を観察することは難しいことが明らかとなっている。T細胞受容体シグナルのレポーターマウスであるNur77-GFPトランスジェニックマウスの解析を行ったが、CD69と同等かそれ以上のシグナル検出能を持ち、ポジティブセレクションの解析に有用であるかもしれない。このように一つの目標を達成するために現在学びうる限りの技術を習得するように努めてきた。最終的な結論には未だ至ってはいないが、今回の特別研究員の意義を失わないように、次のステップにつなげて行きたい。