胸腺プロテアソームによる免疫制御機構の解明

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前年度、β5t発現細胞株を用いて胸腺プロテアソーム依存的に生成されるMHCclassI結合性ペプチドを同定した。これらのペプチドのアミノ酸配列の解析から特定の位置に一定のアミノ酸が頻出することが明らかとなり、本年度ではこれらの結果を裏付けるために胸腺プロテアソームによる基質分解アッセイを行いさらなる解析を進めた。プロテアソームによって容易に分解されるβ-caseinやenolase, ovalbumin等をアフィニティー精製で得られた胸腺プロテアソームへと加え、37℃で反応させた。その後、限外濾過により分解産物のみ抽出し、nanoflow-LC-TOF-MS/MSにより夫々のペプチドの配列を決定した。これらの分解産物の解析からβ5tによって選択的に生じる切断部位を見出すことができた。これらの切断部位付近のアミノ酸配列の解析結果は、MHCclassI結合性ペプチドの同定で明らかとなったアミノ酸の特徴と酷似しており、β5tがアミノ酸配列を認識してタンパク質の分解を行っていることを初めて強く示唆した。β5tを構成因子とする胸腺プロテアソームが作り出したペプチドが胸腺におけるCD8T細胞のポジティブセレクションに必要であるという仮説を提起する為に現時点で最も重要な結果を得ることができたと考えている。さらにこれらのペプチドがT細胞の胸腺内分化に影響するかを解析するために、そのアッセイ系の確立を行った。ペプチドの影響を明確にするためにOTIやP14,HYのT細胞受容体トランスジェニックマウスを導入し、これらのマウスを用いてfetal thymus organ culture (FTOC)を行った。現在このFTOCにおいてペプチドを加えることでT細胞の分化が誘導されるかを試みている。期待する結果が得られたならば胸腺におけるポジティブセレクションがベプチド誘導性であることを初めて証明することになる。