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超高輝度化学発光性生理機能指示薬の開発

超亮化学发光生理功能指示剂的研制

基本信息

批准号：
11J07159
负责人：
張郁芬
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

鉛イオン(Pb2+)に対する化学発光性の指示薬を作成と並行して、Ca2+指示薬作成も行った。Ca2+については蛍光指示薬の知見が豊富で作成にあたってのノウハウが全てPb2+指示薬の作成に活かすことができると考えたからである。当研究室では化学発光タンパク質RLucと蛍光タンパク質Venusを高効率にエネルギー移動が起こるコンフォメーションで連結することにより高輝度化したNano-lantemを開発している。このRLucドメイン内にCa2+結合タンパク質CaMとM13を導入することで、新規Ca2+指示薬Nano-lantern(Cd2+)を開発した。さらにCaMとM13の間のアミノ酸リンカー長を変えることによりCa2+に対する親和性を10nMから500nM程度まで様々な解離定数を持つ6種類の変異体を作成することもできたことは大きな進展であったと言えよう。従来のCa2+プローブでは不可能だった高速度でのイメージングを試みるために、Nano-lantern(Ca2+)をHeLa細胞(培養されたヒト由来の癌細胞)に発現させたところ、これまでの発光性Ca2+プローブでは不可能だったビデオレートでのイメージングに成功しましたこれらの発光プローブは励起光を必要としないため、蛍光タンパク質ではできなかった観察による新たな発見が期待されます。また、光で細胞の活動やタンパク質の機能を制御する「光遺伝学的技術(オプトジェネティクス)」と組み合わせることが容易です。残念ながら、同様の戦略でPb2+指示薬を開発することは適わなかったものの、RLucの重金属感受性についての詳細な知見を得ることができた。本知見は今後の指示薬開発に大いに活かせるものと期待される。

Lead (Pb2 +)-based chemical luminescence indicator is prepared in parallel with Ca2 + indicator. The Ca2 +-containing light indicator is known to be rich and rich, and the Pb2 +-containing light indicator is known to be active. When the laboratory changes the chemical emission of light from RLuc to Venus, the emission of light from Venus increases the efficiency of the Nano-lantem. The introduction of Ca2 +-bound CaM and M13 into the RLUC environment has led to the development of a new Ca2 + indicator Nano-lantern(Cd2 +). CaM and M13 have a high affinity of 10nM and a low affinity of 500nM. It's impossible to develop high-speed Ca2 + films on HeLa cells. Nano-lantern(Ca2 +) is used in HeLa cells (Culturing cancer cells of origin) The discovery of photoactive Ca2 + is not possible. The discovery of photoactive Ca2 + is expected to be successful. The activity and function of light cells are controlled easily by the technology of light genetics. The Pb2 + indicator has been developed in detail for heavy metal sensitivity of RLuc. This article is intended to provide guidance for future developments.