魚類卵子の凍結保存・体外成熟

点击翻译按钮获取中文摘要

本研究の目的は小型魚類を対象とした魚類遺伝資源の保存である。平成23,24年度の研究により、メダカ精巣のガラス化保存と移植精原細胞由来の配偶子のみを生産する不妊三倍体宿主(代理親)の作出に成功し、絶滅危惧種である野生地域集団(東京めだか)を保全する事にも成功した。平成25年度では、全ゲノム配列解読が完了している研究上有用な近交系(Kaga)についても、本技法が応用可能かどうかを調べた。また、メダカには、wnt4への挿入変異により、脊椎が正常に形成されずに、体型が肥満体型になるために正常な交配ができない系統(ダルマメダカ)が存在する。そこで、遺伝的に妊性が低い系統であっても、体型が正常な系統を代理親に用いる事で大量生産可能かどうかを検証した。近交系(Kaga、クロメダカ)の精原細胞含む精巣を凍結融解し、それら精巣細胞を代理親(vasa-GFP緋メダカ)へ移植したところ、代理親はドナー由来のハプロタイプを示す次世代のみを得ることに成功した。さらに、ゲノム解析を行ったところ、ドナーとして使用したKagaと同一であることが確認された。全ゲノム配列が解読されており、研究上重要な近交系の生殖細胞の凍結保存と個体作出に成功した。また、低妊性系統であるダルマ体型メダカについても、正常な体型をしたクロメダカを代理親に用いる事で大量生産することに成功した。ダルマメダカ同士の交配では受精率は低かったが(16/157、10.2%)、正常な体型のクロメダカを代理親に用いることでその受精率は112/144 (79.4%)へと大幅に改善された。また、宿主には、不妊三倍体を用いる事で、それらすべての次世代はドナー由来であることを確認した(231尾中231尾)。代理親魚技法を用いることにより、研究上重要であるにも関わらず、継代することが困難な系統でも、生殖細胞さえ正常であれば大量生産することが可能である。