凍結耐性を付与する筋組織ビルドアップ法の確立と力学特性評価

赋予抗冻性的肌肉组织构建方法的建立及机械特性的评价

• 批准号: 11J08249
• 负责人: 富名腰 敬 (2012)
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: Osaka University (2012)Tokyo University of Agriculture and Technology (2011)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J08249/
• 关键词: 筋細胞組織; 凍結保存; 凍結耐性; 糖輸送タンパク質; トランスポーター; 筋細胞; 遺伝子導入

本研究課題では、遺伝子操作を用いた筋細胞組織の凍結耐性付与法の確立を目標とし、本年度の研究成果は以下の3項目を実施した.1)筋芽細胞への目的遺伝子導入最適化2)筋組織形成後の目的タンパク質発現効率の評価3)標的遺伝子を保持した安定発現細胞株のクローニングとその評価4)トレハローストランスポーター発現筋組織の凍結耐性の評価1)では、マウス由来の筋芽細胞株C2C12へのTret1遺伝子の効率的な遺伝子導入方法を検討した.先ず、従来の遺伝子導入方法では、細胞全体の数%のみの遺伝子導入効率であったのに対して、培養基板に接着タンパク質コーティング(MatriGel^<TM>)を処理することによって、30-60%程度まで導入効率が高まることを見いだした.2)では、遺伝子導入後のC2C12細胞に筋組織形成の分化誘導を促し、目的タンパク質を強制発現し、その細胞集団から筋細胞組織を形成する実験を行った.その結果、筋組織形成に必要な10日間を経た後において、目的タンパク質を保持した細胞は数%程度に減少することが分かった.さらにこの発現細胞集団は筋組織への分化能を維持し、筋組織特有の筋管形状へ分化し、筋組織特有の電気刺激による収縮応答も確認することができた.3)では、目的遺伝子導入の処理後、薬剤選別による安定発現細胞株のクローニングを検討した.その結果、クローニング培養が3週間程度要する中で、目的タンパク質の発現量が減衰し、安定発現細胞株の発現効率は非常に低くなることが分かった.4)では、2)で作製した筋細胞組織をトレハロース含有培地の中で凍結の負荷を与えたところ、細胞膜が強固に保持されることが示され、トランスポータータンパク質の発現によって、筋組織の凍結耐性が向上することが明らかとなった.

This study aims to establish the freezing tolerance of tendon cell tissue and establish the method of freezing tolerance. This year's research results include the following three items: 1) Optimization of target gene introduction in tendon bud cells 2) Evaluation of target gene development efficiency after tendon tissue formation 3) Evaluation of target gene maintenance and stable development of cell lines 4) Evaluation of freezing resistance of tendon tissue 1) Optimization of target gene introduction The efficient gene transfer method of Tret1 gene from C2C12 cell line was discussed. The method of gene introduction includes the following steps: the gene introduction efficiency of several <TM>percent of the whole cells is high, the introduction efficiency is 30-60%, the differentiation induction of tendon tissue formation of C2C12 cells after gene introduction is high, the target gene stress is developed, and the formation of tendon cell tissue of C2C12 cells is high. The results, muscle tissue formation necessary for 10 days after the end of the day, the purpose of the quality of the cells to maintain the degree of reduction In addition, the differentiation ability of tendon tissue was maintained in the developing cell population, and the differentiation of tendon tubule shape specific to tendon tissue was confirmed by electrical stimulation. 3) After the treatment of target gene introduction, the selection of stable developing cell lines was discussed. The results showed that the growth rate of cell lines was very low after 3 weeks of culture. The growth rate of cell lines was very low after 3 weeks of culture. The growth rate of cell lines was very low after 3 weeks of cell lines. The growth rate of cell The freezing resistance of tendon tissue is upward.

项目成果

マイクロ流体デバイスによる初代骨格筋細胞集団のサイズ分画操作

使用微流体装置对原代骨骼肌细胞群进行大小分级

• 发表时间: 2011
• 作者: 関澤佳太; 前田和彦; 堂免一成; 小池和英; 石谷治;富名腰敬
• 通讯作者: 富名腰敬

昆虫筋組織で実現するバイオハイブリッドデバイス

利用昆虫肌肉组织实现的生物混合装置

• 发表时间: 2012
• 作者: 西村秀希;吉田明希子;栂根一夫;前川雅彦;吉田明希子;富名腰敬
• 通讯作者: 富名腰敬

トレハローストランスポーター遺伝子導入による細胞凍結保護機能の構築

导入海藻糖转运蛋白基因构建细胞冷冻保护功能

• 发表时间: 2011
• 作者: Yuhei Oshiba;Takanori Tamaki;Hidenori Ohashi;Hidehiko Hirakawa;Satoshi Yamaguchi;Teruyuki Nagamune;Takeo Yamaguchi;富名腰敬
• 通讯作者: 富名腰敬

Expression of trehalose transporter in mammalian cells for cryopreservation

海藻糖转运蛋白在哺乳动物细胞中的低温保存表达

• 发表时间: 2011
• 作者: 藤大樹;満倉靖恵;Kei Funakoshi
• 通讯作者: Kei Funakoshi

SIZE FRACTIONATION OF PRIMARY MUSCLE CELLS USING HYDRODYNAMICS IN MICROCHANNELS

利用微通道中的流体动力学对初级肌细胞进行大小分级

• 发表时间: 2011
• 作者: Taiki Fuji;Yasue Mitsukura;Toshio Moriya;Kei Funakoshi
• 通讯作者: Kei Funakoshi