硝化グラニュールを用いた窒素含有廃水の高効率処理技術の開発

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前年度までの結果を踏まえて、硝化グラニュール内で優占化しているNitrosomonas mobitisマイクロクラスターの物理的強固さに関与するタンパク質の同定を行った。N. mobilisを2L×5フラスコのスケールで純粋培養を行った。培養液中には肉眼でも確認可能な大きさの細胞集塊が確認された。N. mobilisと同じアンモニア酸化細菌であるNitrosomonas europaeaの純粋株も並行して培養を行っていたのだが、興味深いことにN. europaeaでは細胞集塊は確認されなかった。純粋培養したN. mobiltsを採取し、孔径5μmのフィルターでシングルセルとマイクロコロニーを分離した。分離の精度はフローサイトメーターを用いて確認した。分離したシングルセルおよびマイクロコロニーからそれぞれ全タンパクを抽出した。まず、それぞれのタンパクをSDS-PAGEで解析を行ったところ、100kDa付近および25kDa付近にマイクロコロニー特有のバンドが見られた。同じ純粋株であっても形態の差異が発現タンパクの差異にもなっていることがわかった。これまでの結果より、予想通り、マイクロコロニーに特有なタンパク質が存在する事が明らかになった。さらにタンパク分離の精度を高めるために二次元電気泳動(2D-PAGE)を行った。その結果、マイクロコロニーに特有のバンドが複数確認された。これらのタンパク質の中にマイクロコロニーの物理的強固さに関与するものが含まれていると予想している。