アレルギー関連遺伝子発現制御機構に関する構造生物学的、遺伝生化学的研究

过敏相关基因表达控制机制的结构生物学和遗传生化研究

• 批准号: 11J10301
• 负责人: 吉田 彩子
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11J10301/
• 关键词: GATA-1; PU.1; IgE受容体; アレルギー疾患; 遺伝子発現制御; 一塩基多型; X線結晶構造解析

現代社会において多くの人を悩ませているアレルギー疾患治療には、IgE受容体を介したマスト細胞活性化キナーゼカスケードによる細胞の脱顆粒や遺伝子発現に至る経路を遮断することが有効であると考えられている。本研究ではこのIgE受容体の遺伝子発見機構に着目し、その複数の転写制御因子による制御機構を構造生物学的、遺伝生化学的に明らかにすることを目的としている。これまでにIgE受容体αサブユニット遺伝子は、2つのプロモーター領域を持ち、GATA-1やPU.1をはじめとする様々な転写因子が結合することで正と負の制御を受けることが知られている。そこで、これらの転写因子とIgE受容体αサブユニットのプロモーターDNAとの複合体の結晶構造を決定することで転写調節機構を明らかにすることを目指している。本年度は、ヒト由来のGATA-1やPU.1、さらにこれらと相互作用し、IgE受容体αサブユニットの遺伝子発現制御に関わると予想されるIRF8の組換えタンパク質の取得を目指して実験を行った。大腸菌を宿主として様々な条件でそれぞれのタンパク質の異種発現を試みた所、pColdベクターを用いた系で可溶性の発見が確認された。今後精製条件を検討し、結晶化条件の探索を試みる。また、IgE受容体αサブユニット遺伝子のプロモーター上のGATA-1結合部位には一塩基多型(SNP)が存在しており、GATA-1が持つ2つのZn-fingerドメインがSNPによって生じる2か所の結合部位に強固に結合し、αサブユニットの発現を調節していることが示唆されている。この仕組みを構造生物学的に明らかにするため、GATA-1のZn-fingerドメインの異種発現系を構築し、すでに発現の確認ができている。今後、合成DNAを用いてZn-fingerドメインとの結合の強さをITC(isothermal calorimeter)を用いて評価することや、DNAとの複合体の結晶構造解析を進めていき、SNPによるIgE受容体αサブユニット遺伝子発現機構を明らかにする予定である。

More modern society に お い て く の people を 悩 ま せ て い る ア レ ル ギ ー disease treatment に は, IgE let body を interface し た マ ス ト cell activation キ ナ ー ゼ カ ス ケ ー ド に よ の る cells degranulation や heritage 伝 son 発 hereby に to る 経 road を interrupt す る こ と が have sharper で あ る と exam え ら れ て い る. This study で は こ の IgE by let body の heritage 伝 発 see institutions に the mesh し, そ の plural の planning write suppression factor に よ る royal institution を structural biology, heritage 伝 biochemistry に Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. こ れ ま で に IgE by let body alpha サ ブ ユ ニ ッ ト heritage 伝 は, 2 つ の プ ロ モ ー タ を ー field hold ち や PU, GATA - 1 1 を は じ め と す る others 々 な planning write factor が combining す る こ と で positive と negative の suppression を by け る こ と が know ら れ て い る. そ こ で, こ れ ら の と IgE is planning to write factor, let body alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の プ ロ モ ー タ ー DNA と の complex の crystal structure を decided す る こ と で planning write regulator を Ming ら か に す る こ と を refers し て い る. は this year, ヒ ト origin の や PU GATA - 1 1, さ ら に こ れ ら と し interaction, IgE let body alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の heritage 伝 son 発 now suppression に masato わ る と to think さ れ る IRF8 の group in え タ ン パ ク qualitative の obtain を refers し て be 験 を line っ た. Conditions of coliform を host と し て others 々 な で そ れ ぞ れ の タ ン パ ク qualitative の heterogeneous 発 を now try み た, pCold ベ ク タ ー を with い た department で soluble の 発 see が confirm さ れ た. In the future, the refining conditions will be discussed in を検 and the crystallization conditions will be explored in を and みる. ま た, IgE let body alpha サ ブ ユ ニ ッ ト posthumous son 伝 の プ ロ モ ー タ ー の on combining site GATA - 1 に は a salt Quito type (SNP) が し て お り, GATA - 1 が hold 2 つ つ の zinc finger - ド メ イ ン が SNP に よ っ て raw じ る 2 か の combining site に strong に し, alpha サ ブ ユ ニ ッ ト の 発 now Youdaoplaceholder0 regulates て て る る とが とが indicates されて る る る. こ の blackstone group み を structural biology に Ming ら か に す る た め, 1 の GATA - zinc - finger ド メ イ ン の heterogeneous 発 now を build し, す で に 発 の now confirmed が で き て い る. In the future, the synthesis of DNAを is carried out by using the を てZn-fingerドメ ドメ と と sample in combination with the strong さをITC(isothermal Calorimeter) を い て review 価 す る こ と や, DNA と の complex analytical を の crystal structure into め て い き, SNP に よ る IgE by let body alpha サ ブ ユ ニ ッ ト posthumous son 伝 発 institutions now を Ming ら か に す る designated で あ る.

项目成果

Streptomyces murayamaensis由来の二次代謝産物生合成に関わるアスパラギン酸キナーゼ(NspJ)の機能解析

村山链霉菌次生代谢物生物合成中涉及的天冬氨酸激酶 (NspJ) 的功能分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 辻本舞;吉田彩子;富田武郎;大西康夫;葛山智久;西山真
• 通讯作者: 西山真

転写調節因子PU.1によるMHC class II発現調節機構

转录调节因子 PU.1 对 MHC II 类表达的调节

• 发表时间: 2012
• 作者: 西山千春、北村奈緒、八代拓也;ら
• 通讯作者: ら