Phosphorylation-induced conformational changes and functional regulation of the muscle-atrophy-associated ubiquitin ligase Cbl-b

磷酸化诱导的肌肉萎缩相关泛素连接酶 Cbl-b 的构象变化和功能调节

• 批准号: 23770121
• 负责人: MAITA Ayako
• 金额: $ 3万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23770121/
• 关键词: 分子認識及び相互作用; 構造生物学; 翻訳後修飾

To elucidate the structural basis for enhancement of Cbl-b’s ubiquitin ligase activity through the phosphorylation, we initially constructed a protein expression system for Cbl-b^<39-465>Y363E mutant that mimics the phosphorylated state of Cbl-b. We succeed in the development of a protein purification protocol in order to generate pure protein in sufficient quantities for X-ray crystallographic studies. We carried out crystal screening of a Cbl-b^<39-465>Y363E purified by this protocol. However, Huang’s group reported the crystal structure of the phosphorylated c-Cbl, a homolog of Cbl-b, in January 2012. Thus, we changed the originally planned research project for the study focused on the interaction between the Cbl-b^<39-341>(hereafter called "Cbl-b TKB") and the phosphorylated IRS-1. We succeeded in the crystal structure determination of the Cbl-b TKB in complex with the short phosphopeptide mimetic of phospholylated IRS-1. It revealed the details of the binding mode of Cbl-b TKB to the phosphopeptide.

为了阐明通过磷酸化增强Cbl-b的泛素连接酶活性的结构基础，我们初步构建了<39-465>模拟Cbl-b的磷酸化状态的Cbl-b^Y363 E突变体的蛋白表达系统。我们成功地开发了一种蛋白质纯化方案，以产生足够数量的纯蛋白质用于X射线晶体学研究。我们对通过该方案纯化的Cbl-b-Y363 E进行晶体筛选<39-465>。然而，Huang的研究小组在2012年1月报道了磷酸化c-Cbl的晶体结构，这是Cbl-b的同系物。因此，我们改变了最初计划的研究项目，该研究集中于Cbl-b TKB<39-341>（以下称为“Cbl-b TKB”）和磷酸化IRS-1之间的相互作用。我们成功地确定了与磷酸化IRS-1的短磷酸肽模拟物复合的Cbl-b TKB的晶体结构。揭示了Cbl-b TKB与磷酸肽结合方式的细节。

项目成果

Soy Glycinin Contains a Functional Inhibitory Sequence against Muscle-Atrophy-Associated Ubiquitin Ligase Cbl-b.

• DOI: 10.1155/2013/907565
• 发表时间: 2013
• 期刊: International journal of endocrinology
• 影响因子: 2.8
• 作者: Abe T;Kohno S;Yama T;Ochi A;Suto T;Hirasaka K;Ohno A;Teshima-Kondo S;Okumura Y;Oarada M;Choi I;Mukai R;Terao J;Nikawa T
• 通讯作者: Nikawa T

ユビキチンリガーゼCbl-bのTKBドメインと阻害ペプチドの複合体結晶構造解析

泛素连接酶Cbl-b TKB结构域与抑制肽复合物的晶体结构分析

• 发表时间: 2012
• 作者: Hiromi Yoshida;Akihide Yoshihara;Misa Teraoka;Satoshi Yamashita;Ken Izumori and Shigehiro Kamitori;真板綾子
• 通讯作者: 真板綾子

Crystal structure of Cbl-b TKB domain in complex with Cblin (Cbl-b inhibitor)

Cbl-b TKB 结构域与 Cblin（Cbl-b 抑制剂）复合物的晶体结构

• 发表时间: 2011
• 作者: Ueji T;Shirakata A;KondohS;Nagano K;Maita A;Maita N;Okumura Y;Nikawa T.
• 通讯作者: Nikawa T.

ユビキチンリガーゼ Cbl-b の TKB ドメインと阻害ペプチドの複合体結晶構造解析

泛素连接酶Cbl-b TKB结构域与抑制肽复合物的晶体结构分析

• 发表时间: 2012
• 作者: 安倍 知紀(他 14 名);真板-大野綾子
• 通讯作者: 真板-大野綾子

Cbl-b TKB ドメインと筋萎縮阻害ペプチド Cblin(Cbl-b inhibitor)の相互作用解析

Cbl-b TKB结构域与肌肉萎缩抑制肽Cblin（Cbl-b抑制剂）的相互作用分析

• 发表时间: 2011
• 作者: Hiromi Yoshida;Misa Teraoka;Akihide Yoshihara;Ken Izumori and Shigehiro Kamitori;上地達也
• 通讯作者: 上地達也