Constitution of a signal pathway with a small number of protein components on cell-sized liposomes and the application for analysis of the ligand agents

细胞大小脂质体上少量蛋白质成分信号通路的构建及其在配体试剂分析中的应用

• 批准号: 23770222
• 负责人: TSUMOTO Kanta
• 金额: $ 2.08万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-23770222/
• 关键词: 人工細胞モデル; 巨大リポソーム; シグナル伝達; 膜タンパク質再構成; バキュロウイルス; GUV(Giant Unilamellar Vesicle); 少数要素による構成実験; 細胞情報; GUV

Membrane protein components were incorporated into membranes of giant liposomes (giant unilamellar vesicles, GUVs) by fusing recombinant baculovirus budded virus (BV) envelope particles that displayed (or expressed) the target membrane proteins with membranes of the giant liposomes. In this study, we tried to constitute a classical and fundamental pathway of signal transduction from three kinds of membrane proteins (G-protein coupled receptor, GPCR; G protein; adenylate cyclase, ADCY). The incorporation of single polypeptides of these proteins was observed using a confocal laser scanning microscope on a single GUV level. On the other hand, however, we were faced with a problem to be solved as to reproducibility of biochemical assay of signal transduction (production of cAMP). For promotion of the study related to artificial cell systems, we also successfully developed a novel experimental procedure based on single giant liposomes.

膜蛋白成分被融合到巨型脂质体（巨型Unilamelar囊泡，GUVS）的膜中，通过融合重组的baculovirus budked病毒（BV）包膜颗粒（显示（或表达））靶膜蛋白与巨型脂肪症的膜。在这项研究中，我们试图构成从三种膜蛋白（G蛋白偶联受体，GPCR； G蛋白；腺苷酸环化酶，ADCY）的信号转导的经典和基本途径。使用单个GUV水平的共聚焦激光扫描显微镜观察到这些蛋白质的单多肽的掺入。但是，另一方面，对于信号转导（CAMP的产生）生化测定的可重复性，我们面临着一个问题。为了促进与人工细胞系统有关的研究，我们还成功地开发了一种基于单个巨型脂质体的新型实验程序。

项目成果

Cadherin-integrated liposomes with potential application in a drug delivery system

• DOI: 10.1016/j.biomaterials.2011.09.008
• 发表时间: 2011-12-01
• 期刊: BIOMATERIALS
• 影响因子: 14
• 作者: Kamiya, Koki;Tsumoto, Kanta;Akiyoshi, Kazunari
• 通讯作者: Akiyoshi, Kazunari

界面通過法を用いた膜貫通型タンパク質提示巨大プロテオリポソーム

使用界面通道法展示巨型脂蛋白体的跨膜蛋白

• 发表时间: 2012
• 作者: 西上美佐子;他
• 通讯作者: 他

組換えバキュロウイルスを用いた膜蛋白質の人工脂質膜ベシクルへの再構成

使用重组杆状病毒将膜蛋白重建为人工脂质膜囊泡

• 发表时间: 2013
• 作者: Koki Kamiya;Kanta Tsumoto;TetsuroYoshimura;Kazunari Akiyoshi;湊元幹太
• 通讯作者: 湊元幹太

Size, morphology and lamellarity of giant liposomes generated from solute-containing lipid films

含溶质脂质膜产生的巨型脂质体的尺寸、形态和层状

• 发表时间: 2012
• 作者: Kanta Tsumoto;他
• 通讯作者: 他

次世代ハイブリドーマテクノロジー (次世代医薬開発に向けた抗体工学の最前線（熊谷泉 監修）)

下一代杂交瘤技术（下一代药物开发的抗体工程最前沿（熊谷泉监督））

• 发表时间: 2012
• 作者: 湊元幹太;冨田昌弘;湊元幹太
• 通讯作者: 湊元幹太