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Analysis of the assembly and functional defect of the spliceosome associated with Retinitis pigmentosa

视网膜色素变性剪接体的组装及功能缺陷分析

基本信息

批准号：
23790068
负责人：
MAITA Hiroshi
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2011
资助国家：
日本
起止时间：
2011 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

The spliceosome is a highly dynamic macromolecular ribonucleoprotein (RNP) machine that catalyzes pre-mRNA splicing by assembling U1, U2, U4, U5, and U6 small nuclear (sn)RNPs. To process large numbers of introns, synthesis and recycling of snRNPs must be maintained within an appropriate range to avoid their shortage, which would cause a severe disease such as Retinitis pigmentosa. However, the mechanism that maintains cellular snRNP levels is unknown. We constructed an expression library of a luciferase fragment fused to core components of snRNPs and used it to isolate PRPF6 and U5-40K that specifically reconstitute luciferase activity in the U5 snRNP complex. We revealed that the reporter detects the effects of small molecules on the levels of the U5 snRNP-reporter protein complex. Our assay will be useful to identify the small molecule that can control the snRNP level in an appropriate range.

剪接体是一种高度动态的大分子核糖核蛋白（RNP）机器，通过组装U1、U2、U4、U 5和U6小核（sn）RNP催化前体mRNA剪接。为了处理大量的内含子，snRNP的合成和回收必须保持在适当的范围内，以避免它们的不足，这将导致严重的疾病，如视网膜色素变性。然而，维持细胞snRNP水平的机制尚不清楚。我们构建了一个荧光素酶片段融合snRNP的核心组件的表达文库，并使用它来分离PRPF 6和U 5 - 40 K，特异性地重建荧光素酶活性的U 5 snRNP复合物。我们发现，报告检测小分子对U 5 snRNP-报告蛋白复合物水平的影响。我们的检测方法将有助于鉴定可以将snRNP水平控制在适当范围内的小分子。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

A split luciferase-based reporter for detection of a cellular macromolecular complex.

一种基于分裂荧光素酶的报告基因，用于检测细胞大分子复合物。

DOI：
10.1016/j.ab.2014.01.015
发表时间：
2014
期刊：
Analytical Biochemistry
影响因子：
2.9
作者：
Hiroshi Maita;Kenji Tomita;Hiroyoshi Ariga
通讯作者：
Hiroyoshi Ariga

新規snRNP検出系を用いたスプライソソーム複合体の解析

使用新型 snRNP 检测系统分析剪接体复合物

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
Shuji Mizumoto;Saori Murakoshi,Kittiwan Kalayanamitra;Sarama Sathyaseelan Deepa;Shigeyuki Fukui;Prachya Kongtawelert;Shuhei Yamada;and Kazuyuki Sugahara;笠原明澄海，片倉直哉，奥山瑛智，深水啓朗，川端正俊，山口健太郎，鈴木豊史，伴野和夫;豊田耕司;下野和実，上野裕美，駄場崎泰洋，加茂直樹，宮内正二;Saito Y;冨田健司
通讯作者：
冨田健司

Detection of Free U5 snRNP Levels Using Split Luciferase

使用裂解荧光素酶检测游离 U5 snRNP 水平