膜内配列切断酵素ＳＰＰの基質認識メカニズム解明に向けた構造機能解析

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膜内配列切断プロテアーゼ(Intramembrane cleaving proteases ; I-CLiPs)ファミリー分子は、発生分化や脂質代謝調節など幅広い生命現象において重要な機能を担うとともに、その切断活性の異常は様々な病気の発症メカニズムと関連することが知られている。I-CLiPsは、その活性中心部位が脂質二重膜内に存在する親水性ポア構造に面することで、一見起こり得ない「疎水性環境における加水分解」を行っていることが明らかとなっている。しかし、もともと疎水性環境に存在する基質がどのようにI-CLiPsに認識され、どのように親水性環境へとリクルートされるのか、どのように切断されるか等、具体的な基質認識機構には迫れていない。本研究は、I-CLiPsファミリー分子の1つであるSPP(Signal Peptide Peptidase)をターゲットとし、その詳細な基質認識機構を明らかにすることを目的とする。本年度は昨年度に引き続き、SPPの構造解析および生化学的解析に向けた準備を行った。さらに申請者は、アルツハイマー病の発症に寄与すると報告されているⅠ型一回膜貫通蛋白質SorLAを第二のターゲットとした。申請者はこれまでに、野生型SorLAのVpslOpドメインはアルツハイマー病発症の原因分子と考えられているアミロイドβ(Aβ)と結合する一方、Vps10pドメイン内に家族性アルツハイマー病連鎖変異の1つG511Rを導入すると、Aβと結合できなくなることを見出した。この結果は、G511R変異はSorLAのAβ結合能を失わせ、Aβを分解系へと輸送できなくさせることでアルツハイマー病発症につながる変異である可能性を示すものである。本研究の成果は昨年度、Science Translational Medicineに受理されるに至った。本年度は、I-CLiPsファミリー分子の1つであるγ-secretaseを構成する蛋白質の1つとして知られるnicastrin(Nct)を第三のターゲットとした。Nctはこれまでに、γ-secretase基質の「受容体」であることが知られており、Nctを解析することでI-CLiPsの基質認識機構解明に大きく近づくことができると考えた。本年度はNctのX線構造解析に向けて精製条件の検討を進め、条件を確立させることに成功した。