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新たに発見した牛乳頭腫ウイルス12型(BPV-12)の転写と複製機序の解析

新发现的牛棉铃病毒12型（BPV-12）的转录和复制机制分析

基本信息

批准号：
12J01466
负责人：
朱偉
金额：
$ 1.73万
依托单位：
University of Miyazaki
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012 至 2014
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J01466/
关键词：
牛乳頭腫ウイルス BPV-12 ゲノム欠損BPV-12-del トランスフェクション

项目摘要

BPV12とBPV12-delの全ゲノム解析を行ってその違いを比較するために、BPV-12とBPV12-delの全ゲノムをpUC19とpcDNA3.1ベクターに組み込んだ全ゲノム分子クローンを構成した。一方、大腸菌によるタンパク発現をみるためBPV12とBPV12-delの各初期遺伝子(E1、E2、E4、E7、E8)を増幅させ、それぞれpUC19ベクター内に結合させた。真核細胞における発現をみるためにE1とE2遺伝子はpcDNA3.1ベクターにも組み込んだ。DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)-10%FBS(ウシ胎仔血清)培地にて培養したHela細胞にpBPV-12のpE1、pE2ならびにpBPV-12-delのpE1、pE2の組換え体プラスミドをトランスフェクションした。トランスフェクションした細胞からDNAとRNAを抽出し、複製と転写を確認するために、Real timePCRと逆転写-Real time PCRを行った。その結果、DNA複製がみられることは確認できたが、mRNAを検出することはできなかった。BPV12の転写も確認できなかった。牛乳頭腫ウイルス(BPV)の潜伏期間は1か月から1年間と予想されることから、トランスフェクションした細胞を10代継代培養したが、BPV12の転写は確認できなかった。Hela細胞に代えて、vero細胞、L細胞、MA104細胞、HRT-18細胞にこれら組み換え体をトランスフェクションしたが、BPV12の複製を確認できたのみでmRNAを検出することはできなかった。マウスの肺および腎臓の初代細胞へのトランスフェクションの結果も同様であった。以上、新しく発見されたウイルスBPV12が牛の舌に形成された乳頭腫から検出された。同部位から細胞を採取し継代培養を試みたが、不死化は起こらず、連続継代培養ができなかった。乳頭腫ウイルスは感染動物からの分離が困難であることはよく知られているが、全ゲノムで構成された分子クローンをトランスフェクションした細胞の増殖もまた困難であると考えられる。

The BPV12 BPV12-del data parses the data in different ways. The data are compared to those of the BPV-12 BPV12-del. The full pUC19, the full pcDNA3.1, the full organization, the full molecule, the full data, the data, the data. On the one hand, you can see that the initial stages of the BPV12 BPV12-del (E1, E2, E4, E7, E8) are different from each other, and that the pUC19 should be combined with each other. Eukaryotic cells have been shown to be highly sensitive to E1 and E2 genes. PcDNA3.1 genes are involved in the gene expression. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium)-10%FBS (fetal serum)