ｉｎ　ｖｉｖｏイメージングを目指したｔｕｒｎ－ｏｎ型生理活性分子センサーの開発

开发用于体内成像的开启生物活性分子传感器

• 批准号: 12J02587
• 负责人: 林 隆宏
• 金额: $ 2.53万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J02587/
• 关键词: 糖蛋白質; プロテオミクス; 蛋白質ラベル; 受容体; 抗体マッピング; レクチン; 抗体; 抗原; 蛋白質ラベリング; 蛋白質間相互作用; 蛍光イメージング; 癌マーカー; ラベル化

本研究では、ATPやグルタミン酸などの生理活性分子や細胞表層癌マーカーなどを特異的に認識し、検出・解析する手法の開発を目的としている。これら生理活性分子の急激な濃度変化や糖鎖構造の変化は癌や神経変性などをはじめとする疾患との関連性が深いことが報告されている。よって、これら生体分子を解析できる手法の開発は、病気メカニズムの解明や診断医療に極めて有用であると考えられる。本年度は昨年度・一昨年度に引き続き、動物細胞表層の癌マーカー蛋白質を標的として、その検出・解析法を開発した。具体的には、細胞表層癌マーカー蛋白質（epidermal growth factor receptor; EGFR、human epidermal growth factor receptor 2; HER2, Notch1）に対する抗体にアシル転移触媒である4,4-dimethylaminopyridine(DMAP)を修飾し、抗原−抗体認識駆動による糖蛋白質及び癌マーカー蛋白質の選択的ラベル化法を開発した。Cys-マレイミドカップリング反応のよって抗体(anti-HER2, anti-Notch1 single-chain variable fragment; scFvやanti-EGFR Affibody molecules)にDMAP触媒を連結させ、適切なアシルドナー存在下で標的蛋白質を生きた動物細胞表層でラベル化した。このようにラベル化した膜蛋白質のダイナミックな挙動観察や分解速度解析にも成功した。また、ラベル化した膜蛋白質のラベル化アミノ酸残基を同定し、抗体のエピトープマッピングに成功した。現在はこれらの結果をまとめてJournal of American Chemical SocietyにArticleとして投稿し、現在論文審査中である。

This study aims to develop methods for identifying, detecting and analyzing physiologically active molecules in ATP and cell surface cancer. Changes in the concentration of physiologically active molecules, changes in the structure of sugar chains, and changes in the relationship between cancer and disease The development of molecular biology, disease diagnosis and medical treatment is very useful. This year, the first year of the year, animal cell surface cancer protein detection and analysis method was developed. Specific methods for the selection of epidermal growth factor receptor (EGFR, human epidermal growth factor receptor 2; HER2, Notch1), 4,4-dimethylaminopyridine(DMAP), glycoprotein, and oncoprotein for antibody recognition were developed. Cys-1 antibody (anti-HER2, anti-Notch1 single-chain variable fragment; scFv and anti-EGFR Affibody molecules) is linked to DMAP catalyst, and the target protein is produced in the presence of appropriate molecules, and the surface layer of animal cells is transformed. The analysis of membrane protein was successful. The identification of amino acid residues in protein and antibody was successful. Journal of American Chemical Society Article submitted, paper reviewed.

项目成果

Semi-synthesis of DMAP-tethered lectin as glyco-conjugates selective labeling tool

作为糖缀合物选择性标记工具的 DMAP 栓系凝集素的半合成

• 发表时间: 2012
• 作者: 林隆宏;Sun Yedi;Song Zhining;高岡洋輔;浜地格
• 通讯作者: 浜地格

触媒連結型レクチンによる糖蛋白質のon-cellラベリング

使用催化连接的凝集素对糖蛋白进行细胞上标记

• 发表时间: 2012
• 作者: 林隆宏;Sun Yedi;Song Zhining;高岡洋輔;浜地格
• 通讯作者: 浜地格

触媒連結型レクチンによる糖蛋白質のon-cellラベリングとプロファイリング

使用催化连接的凝集素对糖蛋白进行细胞上标记和分析

• 发表时间: 2013
• 作者: Takahiro Hayashi;Yedi Sun;Tomonori Tamura;Keiko Kuwata;Zhining Song;Yosuke Takaoka;Itaru Hamachi;林隆宏;林隆宏・Sun Yedi・田村朋則・桑田啓子・Song Zhining・高岡洋輔・浜地格
• 通讯作者: 林隆宏・Sun Yedi・田村朋則・桑田啓子・Song Zhining・高岡洋輔・浜地格

触媒連結型レクチンによる糖蛋白質ラベリング(2) : 動物細胞表層における糖蛋白質のラベル化とプロファイリング

使用催化连接凝集素进行糖蛋白标记 (2)：动物细胞表面糖蛋白的标记和分析

• 发表时间: 2013
• 作者: 林隆宏;Sun Yedi;Song Zhining;高岡洋輔;浜地格
• 通讯作者: 浜地格