Ａｍｅｌｏｂｌａｓｔｉｎの癌抑制遺伝子としての働き

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前年度では、AMBNを安定的に高発現する143B-Luc細胞を樹立し、caspase-3を介したアポトーシスを示すことを明らかにした。今年度はさらに、AMBN安定発現株は、colony形成能と細胞遊走能の低下を示すことを見出した。AMBNの下流シグナルとしてSrcおよびその下流であるStat3経路に着目して検討を行った。骨肉腫細胞株におけるAMBNの発現とSrc-Stat3経路の活性化は負の相関を示しており、AMBN安定発現株においてSrc-Stat3経路が不活性化していることを見出した。そこで、AMBN安定発現株に恒常的活性化型Src（Src-Y527F）を過剰発現させると、Stat3の再活性化が認められるとともに、アポトーシスの抑制、colony形成能および細胞遊走能の亢進が認められた。In vivoマウスモデルでは、コントロールの143B-Luc細胞と、AMBN安定発現株をマウスの足に接種すると、AMBN群では原発巣での腫瘍増大の抑制および肺転移の低下が見られた。さらに、AMBN安定発現株に抗がん剤のドキソルビシン（Dox）を作用させると、コントロールと比較して顕著なアポトーシスの増加が観察され、この増加はSrc-Y527Fの過剰発現によって抑制された。またNOS-1細胞（AMBN高発現細胞株）で、AMBNの発現をknockdownし、caspase-3を介したアポトーシスの抑制、遊走能の亢進、Doxに対する感受性の低下が認められた。また143B-Luc細胞にSrcおよびStat3阻害薬を投与すると、AMBN安定発現株の結果を模倣した。以上より、AMBNがSrc-Stat3の抑制を介して骨肉腫の増殖進展を抑制し、Doxに対する感受性を亢進することが明らかとなり、AMBNの発現を指標とした悪性度診断やDoxとの併用によるAMBNの治療への応用の可能性が示された。