昆虫共生細菌による宿主性比操作メカニズムの解明

阐明昆虫共生菌操纵宿主性别比例的机制

基本信息

批准号：
12J05307
负责人：
春本敏之
金额：
$ 2.32万
依托单位：
National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2012
资助国家：
日本
起止时间：
2012-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者は平成２６年度以下の研究を実施した．1.オス殺し分子機構の追究RNA-Seq 解析より，感染オス胚における異常なアポトーシスの原因がオス特異的なDNA 損傷にあることが示された．そこで，DNA 損傷を可視化するために，ヒストン H2Av　（哺乳類 H2AX ホモログ）のリン酸化型（phospho-H2Av）を認識する抗体による免疫染色を行ったところ，DNA 損傷はオスの性染色体上に高頻度に誘導されていることが明らかになった．加えて，感染オス胚の分裂期の細胞では，高頻度に染色体架橋が観察されることを見出した．重要な事に，架橋はオス性染色体に高度に特異的であり，架橋部位には絡まった染色体の塊（tangled mass）が観察された．また，本来であれば娘細胞に均等に分配される染色体が非対称に分配されている像が見られたことから，架橋した染色体は分裂に際して両極に引っ張られ断裂すると推測される．細胞分裂が発生途中で停止する stg 変異体を観察したところ，分裂が起きない感染オス胚では異常なアポトーシスは起きないが， DNA 損傷は依然として性染色体上に見られた．このことは，DNA 損傷の誘導　→　架橋形成・断裂　→　p53 依存的アポトーシスという一連の流れを示唆する．DNA 損傷の中でも，複製ストレスによる複製異常は架橋形成を引き起こすことから，オス殺しの最初のステップはオス性染色体への複製阻害である可能性が強く示唆される．2.スピロプラズマの遺伝子発現解析オス殺しに関連するスピロプラズマ遺伝子を同定するため，RNA-Seq による遺伝子発現解析を行っている．スピロプラズマ系統としてMSROに加えて近縁種由来でオス殺しを起こす NSRO，オスを殺さない NAROA を使用し，合計３反復分のデータ取得が完了している．今後，系統間の発現変動遺伝子解析を進める予定である．

申请人从2014财政年度开始进行研究。 1。雄性杀伤分子机制的RNA-SEQ分析表明，感染男性胚胎的异常凋亡是男性特异性DNA损伤。因此，为了可视化DNA损伤，使用一种抗体进行免疫染色，该抗体识别组蛋白H2AV（哺乳动物H2AX H2AX同源物）的磷酸化形式（磷酸-H2AV），并揭示了男性男性性染色体经常诱导DNA损伤。此外，我们发现在感染男性胚胎的有丝分裂细胞中经常观察到染色体交联。重要的是，交联对男性染色体高度特异，在交联位点观察到纠结的肿块。此外，由于染色体的图像通常会均匀地分布在子细胞中，因此假定将交联的染色体将其拉到杆上并在分裂时撕裂。当我们观察到导致细胞分裂在发育过程中停止的STG突变体时，没有发生的被感染的雄性胚胎发生异常的凋亡，但在性染色体上仍发现DNA损伤。这表明了一系列步骤：诱导DNA损伤→交联的形成/撤销→依赖p53依赖性凋亡。在DNA损伤中，由复制应力引起的复制异常会导致交联，这强烈表明，男性杀戮的第一步是抑制对男性染色体的复制。 2。螺旋体基因表达分析以鉴定与男性杀伤相关的螺旋质基因，使用RNA-Seq进行了基因表达分析。除了MSRO外，还来自密切相关的物种NSRO，导致雄性杀戮和不杀死男性的Naroa，并且总共完成了三个迭代的数据获取。我们计划继续对线之间改变表达的基因进行基因分析。