ＥｐｈＡ２受容体の新たなシグナル伝達機構の解明とがんの浸潤・転移への関与

阐明EphA2受体新的信号转导机制及其参与癌症侵袭和转移

• 批准号: 12J07194
• 负责人: 原田 耕平
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J07194/
• 关键词: シグナル伝達; 細胞生物; EphA2受容体; がん; Rho family GTPases; 3D culture; シグナル伝連

チロシンキナーゼ受容体EphA2は浸潤・転移性を示すがん細胞で高発現している。所属する研究室ではシグナル伝達の観点から、EphA2のがん化促進メカニズムの解析を行っている。以前の研究からEphA2はリガンド非依存的に、細胞運動・接着に関与するRhoファミリー低分子量G蛋白質RhoGとその活性化因子Ephexin4を介し、がん細胞の運動亢進及びアノイキス耐性の獲得に寄与することを明らかにしていた。本研究ではこのシグナルの抑制機構を調べるために、イヌ腎臓由来のMDCK細胞を用いた三次元培養モデルに着目した。この解析では、肝細胞増殖因子HGF刺激によるがん細胞様の浸潤形質の誘導を、シスト(上皮管腔構造)の伸長を指標として確認できる。昨年度の成果から、EphA2ノックダウンによりシストの伸長が抑制されることがわかった。そこで、野生型EphA2、897番目のセリン(S897)をアラニンに置換した変異体EphA2-SA、そしてチロシンキナーゼ活性を欠失させた変異体EphA2-KMを、それぞれEphA2ノックダウン細胞に発現させ三次元培養を行った。その結果、野生型及びKM変異体を発現させた場合のみノックダウン効果の消失が見られた。またEphexin4ノックダウンでもシストの伸長が抑制されることから、野生型Ephexin4、RhoG活性化機能を欠失させた変異体を、それぞれEphexin4ノックダウン細胞に発現させたところ、野生型を発現させた場合のみノックダウン効果の消失が見られた。さらに、HGFのRhoG活性制御におけるEphA2の関与を調べた。コントロール細胞ではHGF刺激後に、RhoG活性が上昇するのに対し、EphA2ノックダウン細胞では活性に変化は見られなかった。以上の結果から、MDCK細胞ではHGF刺激によりEphA2のS897がリン酸化され、Ephexin4/RhoG経路が活性化されることでシスト伸長を制御する可能性が示唆された。

The receptor EphA2 is a highly reactive and migratory cell. The affiliated research office is responsible for the analysis of EphA2 and EphA2. Previous studies have shown that EphA2 is dependent on cell motility and subsequent activation of Ephexin4, a low-molecular-weight G protein, and the acquisition of cell hyperkinesia and cell tolerance. In this study, we investigated the mechanism of cell inhibition by three-dimensional culture of MDCK cells This analysis confirms that hepatocyte growth factor HGF stimulates the induction of cellular infiltration and elongation of epithelial lumen structure. Last year's results, EphA2 In addition, wild type EphA2 and 897 cells (S897) were isolated and replaced with variant EphA2-SA, variant EphA2-KM and variant EphA2-KM. The results, wild-type and KM variants were found in all cases, and their effects disappeared. The elongation of Ephexin4 was inhibited when Ephexin4 and RhoG were not activated, and when Ephexin4 and RhoG were not activated, Ephexin4 and RhoG disappeared. In addition, HGF and RhoG activity control EphA2 related to the regulation of HGF. RhoG activity in EphA2 cells increased after HGF stimulation. These results suggest that MDCK cells may respond to HGF stimulation by activating EphA2 and S897, and inhibiting Ephexin4/RhoG pathway elongation.

项目成果

HGF-induced serine 897 phosphorylation of EphA2 regulates epithelial morphogenesis of MDCK cells in three-dimensional culture

HGF诱导的EphA2丝氨酸897磷酸化调节三维培养中MDCK细胞的上皮形态发生

• 发表时间: 2015
• 期刊: Journal of Cell Science
• 影响因子: 4
• 作者: Kohei Harada;Manabu Negishi;Hironori Katoh
• 通讯作者: Hironori Katoh