人工転写因子のエンジニアリングによるiPS細胞の作製

通过工程化人工转录因子产生 iPS 细胞

• 批准号: 24510315
• 负责人: JUNG Dongju
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-24510315/
• 关键词: 人工転写因子; iPS細胞

今回の研究に際し、終了した2つの項目を報告する。1)Oct3/4-AuSTF(Oct3/4-Gold nanoparticle人工転写因子)の作製と、その性能の評価。2)作製したoct3/4-AuSTFを用いて、マウス人工多能性幹細胞(iPS細胞)の樹立。まず1)は既に完了していた。科研費申請書にも記載されていた通り、内因性転写因子の一つであるOct3/4に模した人工転写因子は既に作製済みであり、その転写活性も確認済みであった。転写活性の確認として、Oct3/4レポーター遺伝子の活性と、Oct3/4の内因性標的遺伝子の誘発を分析した。その結果、レポーター遺伝子の活性は、コントロールとして使用したGold nanoparticleのみの人工転写因子よりも10～12倍も高い活性を示した。しかしながら、内因性Oct3/4標的遺伝子の誘発率はそれほど著しいものではなく、コントロールより2～3倍高い誘発率となった。これらの結果をふまえ、内因性Oct3/4標的遺伝子の誘発をより高めるため、Oct3/4-AuSTFの改良を行った。改良点として、まず初めに様々な大きさのGold nanoparticleを用いた。直径5nmから100nmの大きさのGold nanoparticleを機能的リガンドと結合させ、Oct3/4AuSTFを作製し、内因性Oct3/4標的遺伝子に対するそれぞれの転写活性を比較した。その結果、最少サイズである5nmが一番強い活性を示していたが、それでもまだ一貫性が得られなかった。この点から考えるに、大きさの違う細胞を用いて試みることが必要であると考えられた。そして2つ目の改良点として、様々な種類の結合子を用いた。その結果、末端が水酸基と結合している結合子が、物理的性質と、Oct3/4-AuSTFの転写活性において良好な結果を示した。

This year's research has been completed and the project has been reported 1) Evaluation of the manufacturing and performance of Oct3/4-AuSTF(Oct3/4-Gold nanoparticle artificial writing factor). 2)The establishment of artificial pluripotent stem cells (iPS cells) by using OCT3/4-AuSTF. 1) The application for scientific research fee shall record the communication, internal writing factor and manual writing factor, and confirm the activity of writing. Confirmation of activity, analysis of activity of Oct3/4 target gene, analysis of induction of Oct3/4 target gene The results showed that the activity of Gold nanoparticles was 10~12 times higher than that of gold nanoparticles. The induction rate of the intrinsic Oct3/4 target is 2~3 times higher than that of the natural Oct3/4 target. The result of this study is that the intrinsic Oct3/4 target gene is induced by the improvement of Oct 3/4-AuSTF. The Gold nanoparticle was used in the first part of the experiment. A large Gold nanoparticle with a diameter of 5nm and a diameter of 100nm is used for functional separation, binding and control of Oct3/4 AuSTF, and intrinsic Oct3/4 target DNA. The results show that at least 5nm of activity is strong and consistent. This is the first time I've ever seen you. 2. The improvement points of the eye, the variety and the combination are used. The results show that the terminal acid group binds to the conjugate, the physical properties, and the writing activity of Oct3/4-AuSTF are excellent.