权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

シロイヌナズナ熱活性型レトロトランスポゾンの制御機構

拟南芥热激活反转录转座子的调控机制

基本信息

批准号：
14J02452
负责人：
松永航
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、シロイヌナズナにおいて同定された熱活性型レトロトランスポゾンONSENの活性制御機構を解明することを目的とした。そこで、(1)形質転換体を利用したONSENのプロモーター解析、(2)組織特異的なONSENの転写解析、(3)ONSENインテグラーゼ相互作用因子解析、の3つの側面から研究を行った。(1)では、ONSENの転写制御機構を解明するため、プロモーターとして機能しているLong terminal repeat (LTR)全長配列を、GFPをレポーター遺伝子とした形質転換体を作製した。トランスジーンの発現は熱ストレスから3日程度で消失するが、トランスジーンのDNAメチル化状態を調べたところ、トランスジーンの活性はsiRNAによる制御を受けているものの、DNAメチル化とは独立した制御であることが示唆された。また転写関連因子同定のため、形質転換体に対してEMS変異原処理を行い、変異集団の中からスクリーニングを行い、常温においてもGFPの発現が確認されたライン(gem1, gem2, gem3)を得ることができた。またこれらの変異体は、熱ストレス直後における内在性のONSENの発現が、siRNA生合成経路の変異体と同等かそれ以上に高くなっていた。 (2)については昨年度に引き続き、野生型、siRNA変異体の熱ストレス処理直後及び常温に戻して5日後のONSEN転写レベルを、茎頂とコントロールとした胚軸において比較したところ、茎頂においてもsiRNAによって転写が制御されているという昨年度の成果を補強する結果が得られた。(3) では、インテグラーゼ抗体の特異性が低く、反復実験において一貫した結果が得られなかったため、siRNAが相互作用することが知られているArgonaute 4 (AGO4)が転移制御に影響していると考え、AGO4特異的抗体を用いてWestern blottingを行った。しかし、こちらにおいても抗体の特異的反応性が得られなかった。

The purpose of this study is to determine the activity of ONSEN in the same way. The main results are as follows: (1) the analysis of the ONSEN profile, (2) the ONSEN analysis of the tissue characteristics, (3) the analysis of the interaction factors, and the analysis of the interaction factors. (1) the whole length of the Long terminal repeat (LTR) of the system, the system and the control machine of the system and the system of the GFP system shall be equipped with the whole length of the system, and the system of the GFP system will be installed in the shape of the machine. You can see that the situation has disappeared in 3 days. You can see that the situation has disappeared in 3 days. The situation has disappeared. The situation has disappeared. The DNA has changed its status. The status has disappeared. It has been activated. The siRNA has been controlled and controlled. The DNA has been modified. The factors are the same as those in gem1, the shape is the same as that in the EMS, the data in the collection is the same as that in the normal temperature, and the normal temperature is the same as that in the gem1, gem2, gem3). The internal ONSEN is present, and the synthetic pathway of siRNA is the same as that above. (2) after the introduction of the wild type, the wild type, the siRNA virus, and the normal temperature after 5 days, the ONSEN was used to compare the results of the previous year, including the wild type, the wild type and the normal temperature. (3) the specificity of antibody was significantly lower than that of the control group. The results showed that the antibody of AGO4 specific antibody was not specific, and that the antibody of AGO4 specific antibody was detected by Western blotting assay. The results showed that the antibody of AGO4 specific antibody was detected by immunoassay, and that the antibody of AGO4 specific antibody was detected by immunoassay. The reactivity of the antibody was detected in the first place.