食道癌に対するハイブリッド型分子標的ペプチドを用いた新規抗癌治療薬の研究

使用混合分子靶向肽治疗食管癌的新型抗癌疗法的研究

• 批准号: 14J02741
• 负责人: 菊池 理
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J02741/
• 关键词: ハイブリッドペプチド; EGFR; 食道癌; 化学療法; 分子標的ペプチド

本研究は既存の抗EGFR療法と異なる作用機序を持つハイブリッド型分子標的ペプチドであるEGFR-lyticペプチドの食道癌細胞株に対する有効性をin vitro, in vivoの実験系で検証し、食道癌、特に抗癌剤耐性食道癌に対する有効な治療法を確立することを目的とした。食道癌細胞株（TE-5, TE-8, TE-10, TE-11）および5-FU耐性細胞株（TE-5R, TE-11R）のEGFR発現量、EGFR変異の有無をWestern blot法、PCR法で検討し、全ての食道癌細胞株におけるEGFRの発現を確認した。またこれらの細胞株においてEGFR-lyticペプチドが低濃度（IC50値 < 5μM）の低濃度で抗腫瘍効果を発揮することを確認した。位相差顕微鏡でのタイムラプスイメージング及びLDHアッセイにより、この抗腫瘍効果の機序が細胞膜の破壊によるものであり、抗腫瘍効果が短時間（30分以内）で発揮されることを確認した。TE-11R細胞を用いてマウスxenograftを作成、EGFR-lyticペプチドおよびコントロールペプチドを複数回皮下投与して腫瘍体積を継時的に測定し、EGFR-lyticペプチドが有意に抗腫瘍効果を有することを確認した。 EGFR-lyticペプチドをマウスに種々の濃度、期間、投与法で投与し、食道および他の臓器への安全性を確認した。組織学的、血液学的に検討し、特に投与の支障となるような有害事象を認めなかった。 さらにヒト皮膚細胞および食道細胞を用いた3D培養モデルにEGFR-lyticペプチドを曝露し、組織学的にEGFR-lyticペプチドによる傷害を認めなかった。以上の結果をScientific reports誌に投稿し、2016年2月に掲載された。

This study aims to establish an effective treatment for esophageal cancer in vitro, in vivo and in vivo by maintaining the differential mechanism of action of existing anti-EGFR therapies and EGFR-lytic targets against esophageal cancer cell lines. EGFR expression in esophageal cancer cell lines (TE-5, TE-8, TE-10, TE-11) and 5-FU resistant cell lines (TE-5R, TE-11R) was examined by Western blot and PCR, and EGFR expression in all esophageal cancer cell lines was confirmed. The EGFR-lytic protein in these cell lines was detected at low concentrations (IC50 < 5μM) and the anti-tumor effect was confirmed at low concentrations. Phase contrast microscopy was used to determine the mechanism of anti-tumor effect, and the anti-tumor effect was developed in a short time (within 30 minutes). TE-11R cells were used to create a xenograft, EGFR-lytic selection and selection, and to determine the size of the tumor when it was injected into multiple cells. EGFR-lytic selection was used to determine the effect of intentional anti-tumor. EGFR-lytic test results confirm the concentration, duration, and safety of the test results. Histological, hematological, and other aspects of the disease. In addition, the EGFR-lytic cells were exposed to light in 3D culture, and the EGFR-lytic cells were damaged histologically. The above results were published in Scientific reports in February 2016.

项目成果

Novel EGFR-targeted strategy with hybrid peptide against oesophageal squamous cell carcinoma.

• DOI: 10.1038/srep22452
• 发表时间: 2016-03-09
• 期刊: Scientific reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Kikuchi O;Ohashi S;Horibe T;Kohno M;Nakai Y;Miyamoto S;Chiba T;Muto M;Kawakami K
• 通讯作者: Kawakami K

Establishment of a 5-fluorouracil-resistant esophageal squamous cell carcinoma cells with dihydropyrimidine dehydrogenase gene amplification.

二氢嘧啶脱氢酶基因扩增5-氟尿嘧啶耐药食管鳞癌细胞株的建立。

• 发表时间: 2015
• 作者: Kikuchi;O;Baba;K;Ohashi;S and Muto;M.
• 通讯作者: M.

Notch3-mediated squamous cell differentiation shows anti-tumor effect on esophageal squamous cell carcinoma as well as reduces its resistance to 5-Fluorouracil.

Notch3介导的鳞状细胞分化对食管鳞状细胞癌具有抗肿瘤作用，并降低其对5-氟尿嘧啶的耐药性。

• 发表时间: 2015
• 作者: Kikuchi;O;Ohashi;S;Nakai;Y;Amanuma;Y;Yoshioka;M;Miyamoto;S;Natsuizaka;M;Nakagawa;H;Chiba;T and Muto;M.
• 通讯作者: M.

Cytotoxicity and safety of EGFR-lytic hybrid peptide against esophageal squamous cell carcinoma in vitro

EGFR 裂解杂合肽对食管鳞状细胞癌的体外细胞毒性和安全性

• 发表时间: 2014
• 作者: 菊池 理，大橋 真也，堀部 智久;河野 雅之，武藤 学，川上 浩司
• 通讯作者: 河野 雅之，武藤 学，川上 浩司

Novel 5-fluorouracil-resistant human esophageal squamous cell carcinoma cells with dihydropyrimidine dehydrogenase overexpression.

• DOI: 10.14989/doctor.k19597
• 发表时间: 2015-07
• 期刊: American journal of cancer research
• 影响因子: 5.3
• 作者: Osamu Kikuchi;S. Ohashi;Y. Nakai;S. Nakagawa;K. Matsuoka;T. Kobunai;T. Takechi;Y. Amanuma;M. Yoshioka;Tomomi Ida;Yoshihiro Yamamoto;Y. Okuno;S. Miyamoto;H. Nakagawa;K. Matsubara;T. Chiba;M. Muto