網羅的スクリーニングによる、動原体の安定性を保証する分子機能ネットワークの解明
通过全面筛选阐明保证着丝粒稳定性的分子功能网络
基本信息
- 批准号:14J05063
- 负责人:
- 金额:$ 2.91万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2014
- 资助国家:日本
- 起止时间:2014-04-25 至 2017-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、分裂酵母をモデル生物として用いて、真核生物の染色体上で動原体の確立を決定づける因子(動原体確立因子)を同定することを目的としている。平成27年度までに、LacI-LacO系を用いた動原体確立因子の網羅的探索を行った。LacIタンパク質とLacOリピートの間の結合を利用し、分裂酵母における動原体タンパク質をLacIタンパク質と融合させたplasmidを作成し、染色体上のLacOリピート上に結合させ、この状態で内在性のセントロメアを人工的に破壊することで、LacOリピート付近に動原体の新規形成を引き起こす動原体確立因子を同定した。興味深いことに、得られた因子は酵母からヒトまで幅広く保存されたDNA結合性のタンパク質であった。この因子の破壊株は致死であることから、生育に必須の重要な機能があると考えられる。平成28年度は、平成27年度中に同定したセントロメアの新規確立を決定づける確立因子の機能を、より詳細に解析した。この因子を強制的に結合させた際に新規の動原体が形成されるのは、染色体の末端付近に存在するヘテロクロマチンに隣接した領域に限られた。また、この動原体タンパク質のDNA結合ドメインと考えられている部位を人為的に欠損させた変異タンパク質を、GFP-LacIに融合しLacOリピートに結合させ、内在性のセントロメアを破壊させたところ、全長の際に観察された動原体の形成効率が、顕著に減少した。この結果は、このDNA結合ドメインが、ただ単にこの因子のクロマチンへのリクルートに寄与するだけでなく、セントロメアを新規に形成する過程において、新たな役割を持つことを示唆していた。これらの結果から、動原体確立タンパク質とcisのクロマチン状態が協調して新規に動原体を形成すると考えられる。
In this study, we studied the role of kinetosome in eukaryotic chromosomes and in eukaryotic chromosomes. In 2007, the LacI-LacO system was used to explore the establishment of a vector network. LacI protein and LacO protein are used to form the plasmid, LacI protein and LacO protein are fused on the chromosome, and the intrinsic state of LacI protein and LacO protein is artificially broken. The DNA binding activity of the yeast is very high. This factor is important to the survival of the plant and the reproduction of the plant In 2008, the new regulations were established in the same way as in 2009, and the functions of the established factors were analyzed in detail. These factors combine to form new kinetosomes, and the terminal regions of chromosomes are restricted. The DNA binding rate of the kinetosome was artificially reduced due to the lack of DNA binding, GFP-LacI fusion and DNA binding, intrinsic DNA binding, and full-length detection. The results show that the DNA binding factors are different from each other, and the new DNA binding factors are different from each other. The result is that the kinetogen is established in the state of coordination and the kinetogen is formed in the state of coordination.
项目成果
期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
セントロメア新規獲得におけるRNAiの機能解析
RNAi 在新着丝粒获取中的功能分析
- DOI:
- 发表时间:2014
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tange Y;Chikashige Y;Takahata S;Kawakami K;Higashi M;Mori C;Kojidani T;Hirano Y;Asakawa H;Murakami Y;Haraguchi T;Hiraoka Y.;Kei Kawakami and Kojiro Ishii;Yoshihiro Matsumura and Hirofumi Sato;松村祥宏;Kei Kawakami and Kojiro Ishii;Kei Kawakami;Yoshihiro Matsumura;川上 慶
- 通讯作者:川上 慶
Histone methyltransferase complex CLRC regulates heterochromatin spreading
组蛋白甲基转移酶复合物 CLRC 调节异染色质扩散
- DOI:
- 发表时间:2015
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tange Y;Chikashige Y;Takahata S;Kawakami K;Higashi M;Mori C;Kojidani T;Hirano Y;Asakawa H;Murakami Y;Haraguchi T;Hiraoka Y.;Kei Kawakami and Kojiro Ishii
- 通讯作者:Kei Kawakami and Kojiro Ishii
The functional analysis of the RNAi machinery in the neocentromere formation
新着丝粒形成中 RNAi 机制的功能分析
- DOI:
- 发表时间:2014
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tange Y;Chikashige Y;Takahata S;Kawakami K;Higashi M;Mori C;Kojidani T;Hirano Y;Asakawa H;Murakami Y;Haraguchi T;Hiraoka Y.;Kei Kawakami and Kojiro Ishii;Yoshihiro Matsumura and Hirofumi Sato;松村祥宏;Kei Kawakami and Kojiro Ishii;Kei Kawakami
- 通讯作者:Kei Kawakami
Histone methyltransferase complex CLRC regulates heterochromatin spreading independently of RNAi
组蛋白甲基转移酶复合物 CLRC 独立于 RNAi 调节异染色质扩散
- DOI:
- 发表时间:2015
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:Tange Y;Chikashige Y;Takahata S;Kawakami K;Higashi M;Mori C;Kojidani T;Hirano Y;Asakawa H;Murakami Y;Haraguchi T;Hiraoka Y.;Kei Kawakami and Kojiro Ishii;Yoshihiro Matsumura and Hirofumi Sato;松村祥宏;Kei Kawakami and Kojiro Ishii
- 通讯作者:Kei Kawakami and Kojiro Ishii
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- 发表时间:
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- 作者:
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長原 礼宗
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