ウイルス関連ＲＮＡ（ＶＡ　ＲＮＡ）欠失アデノウイルスベクターの有用性の実証

证明病毒相关 RNA (VA RNA) 缺失的腺病毒载体的有用性

基本信息

批准号：
14J05433
负责人：
前川文
金额：
$ 1.39万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J05433/
关键词：
アデノウイルスベクター virus-associated RNA HDGF 神経分化誘導遺伝子導入 shRNA

项目摘要

アデノウイルスベクター(AdV)からは2種類のウイルス随伴RNA (VA RNA)が常に発現している。VA RNAはウイルス増殖に必須では無いため、VA RNA発現細胞による作製法では力価が低いあるいは作製できないなどの問題があった。そこでFLP/FRTを応用した新たなVA欠失AdVの作製法を確立した。平成27年度はVA RNAのウイルス複製における役割の解析とともに、VA欠失AdVを用いたiPS細胞からの運動ニューロンの誘導についても検討を加えたので報告する。1.VA RNAの機能解析マイクロアレー解析によりVA RNAにより発現が変動したことが確認された新規遺伝子のうちHDGFに着目した。HDGFはアデノウイルス複製初期においてVA RNA依存的に発現が減少しており、これまでに報告されていたウイルス複製後期においてVA RNA依存的に発現が減少する細胞遺伝子とは全くことなっていた。そこで、VA RNAとHDGFの相互作用について解析した結果、HDGFはアデノウイルス複製開始に必須であるE1タンパク質が機能するために必要なCtBPとの結合を競合拮抗することによりアデノウイルスの複製を抑制する宿主細胞の防御遺伝子の1つであり、VA RNAはHDGFの発現を抑制することによりアデノウイルスが増殖しやすい環境を整えている可能性が示唆された。2.VA欠失AdVによる運動ニューロンの誘導iPS細胞から神経細胞の誘導にはmiRNAの関与が報告されている。そこでNgn2、Isl1及びLhx3を発現するVA欠失AdVを作製し、iPS細胞からNeurosphereを経てこれらのAdVを導入して運動ニューロンを誘導する効率について検討を行った。その結果、既存法と比べ約7倍の効率で運動ニューロンが誘導された。

两种类型的病毒相关RNA（VA RNA）经常从腺病毒载体（ADV）表达。由于VA RNA对于病毒增殖不是必不可少的，因此存在诸如低滴度或无法使用表达VA RNA的细胞产生的问题。因此，我们建立了一种使用FLP/FRT创建VA缺陷ADV的新方法。 2015年，我们还研究了VA RNA在病毒复制中的作用，并使用VA缺陷型ADV研究了来自IPS细胞的运动神经元的诱导。 1。对VA RNA的功能分析，我们集中在HDGF上，HDGF是一种新型基因，被证实通过微阵列分析通过VA RNA波动。 HDGF在腺病毒复制的早期阶段具有VA RNA依赖性表达，与先前报道的细胞基因完全不同，这些细胞基因在病毒复制的晚期复制的晚期阶段降低了表达。因此，我们分析了VA RNA和HDGF之间的相互作用，并建议HDGF是宿主细胞防御基因之一，通过竞争竞争抗衡CTBP与CTBP的结合来抑制腺病毒复制，这对于启动腺病毒复制的启动至关重要。 2。通过VA缺陷型ADV诱导运动神经元的诱导miRNA的参与已报道IPS细胞的神经元诱导。因此，我们创建了表达NGN2，ISL1和LHX3的VA缺陷ADV，并通过通过神经球引入IPS细胞来研究了诱导运动神经元的效率。结果，运动神经元的效率比现有方法高约7倍。