亜種間コンソミック系統を基盤とした新規難聴モデルマウスの樹立

基于亚种间染色体株的新型听力损失小鼠模型的建立

• 批准号: 14J06119
• 负责人: 宮坂 勇輝
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06119/
• 关键词: 遺伝学; マウス; コンソミック系統; 加齢性難聴; Lrrc30; Cdh23

本研究は、加齢性難聴感受性C57BL/6J系統と加齢性難聴抵抗性MSM/Ms系統間のコンソミック系統の解析によって同定したマウス加齢性難聴遺伝子座ahl3の実態を解明し、同定した遺伝子のマウス変異体を樹立することを目的とした。本年度はその候補として同定したLrrc30のMSM/Msマウス由来のDNA断片をC57BL/6J系統に導入したトランスジェニック（Tg）マウスとLrrc30ノックアウト（KO）マウスの表現型解析およびLRRC30と相互作用する蛋白質の探索を実施した。1. Lrrc30の加齢性難聴における感受性 (抵抗性) 効果の検証Lrrc30の加齢性難聴感受性 (抵抗性) 効果を検証するため、Tgマウスの経時的な聴力閾値を調査した結果、前年度報告した通りLrrc30の発現量が回復したTgマウスの加齢性難聴の重篤度はC57BL/6Jと比較して軽度化したが、その効果は極めて弱いものと考えられた。また、前年度樹立したLrrc30 KOマウスの経時的な聴力測定および蝸牛有毛細胞感覚毛の形態観察を実施したが、現時点で野生型との間に有意な聴力差および形態異常は認められず、本研究期間内にLrrc30の加齢性難聴への効果を実証するには至らなかった。2. LRRC30と相互作用する蛋白質の同定前年度相互作用が示唆されたCDH23とLRRC30のより詳細な発現・局在をSTED (Stimulated emission depletion) レーザー顕微鏡を用いた免疫染色により調査した結果、LRRC30は成熟後の蝸牛有毛細胞において感覚毛膜に沿って点在的に発現し、その一部はCDH23との共局在が観察された。また、CDH23と相互作用し感覚毛間をつなぐリンクに発現するPCDH15のSTEDレーザー顕微鏡による発現・局在観察を行った結果、その発現パターンはLRRC30と類似していた。これらの結果から、LRRC30は感覚毛間をつなぐリンクにも局在し、それらの蛋白質と相互作用する可能性が示唆された。

The purpose of this study is to clarify the state of the interaction between the C57BL/6J system and the MSM/Ms system, and to establish the interaction between the C57BL/6J system and the MSM/Ms system. This year, we have been exploring the protein phenotype analysis and interaction of Lrrc 30 with the introduction of DNA fragments from Lrrc30 and MSM/Ms into C57BL/6J system. 1. Lrrc30's enhanced susceptibility (resistance) effect was tested and Tg was measured. Results of the previous annual report showed that Lrrc30's enhanced susceptibility (resistance) effect was tested and Tg was measured. In the past year, when Lrrc30 KO was established, the force measurement and morphological observation of snail hairy cell hair were carried out. In the current point, the force difference and morphological abnormality between wild-type and wild-type were intentionally detected. During the period of this study, the effect of Lrrc30 increased resistance was confirmed. 2. LRC30 protein interaction with CDH23 and LRC30 was detected in detail in STED (Stimulated Emission Depletion) by immunostaining. LRC30 protein interaction with mature snail hairy cells was detected in CDH23 and LRC30 protein interaction with CDH23. The interaction between CDH23 and PCDH15 is similar to that between CDH 23 and PCDH15. These results indicate that LRRC30 is sensitive to the presence of proteins and the possibility of protein interactions.

项目成果

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マウス成熟内耳におけるLrrc30の高発現と加齢性難聴抑制効果の関連を探る!

探讨小鼠成熟内耳中Lrrc30高表达与其抑制年龄相关性听力损失作用的关系！

• 发表时间: 2015
• 作者: 宮坂勇輝;安田俊平;関 優太;松岡邦枝;日比野 浩;木南 凌;吉川欣亮
• 通讯作者: 吉川欣亮

Monographs in Human Genetics -Genetics of Deafness-

人类遗传学专着 - 耳聋遗传学 -

• 发表时间: 2016
• 作者: Kikkawa Y;Miyasaka Y
• 通讯作者: Miyasaka Y

Heterozygous mutation of Ush1g/Sans in mice causes early-onset progressive hearing loss, which is recovered by reconstituting the strain-specific mutation in Cdh23

• DOI: 10.1093/hmg/ddw078
• 发表时间: 2016-05-15
• 期刊: HUMAN MOLECULAR GENETICS
• 影响因子: 3.5
• 作者: Miyasaka, Yuki;Shitara, Hiroshi;Kikkawa, Yoshiaki
• 通讯作者: Kikkawa, Yoshiaki

ロイシンリッチリピート蛋白質LRRC30の発現はマウスの加齢性難聴発症を抑制する!?

富含亮氨酸的重复蛋白 LRRC30 的表达是否会抑制小鼠年龄相关性听力损失的发生？

• 发表时间: 2014
• 作者: 宮坂勇輝;安田俊平;関 優太;松岡邦枝;日比野 浩;木南 凌;吉川欣亮;宮坂勇輝，安田俊平，関 優太，松岡邦枝，日比野浩，木南 凌，吉川欣亮;宮坂勇輝，安田俊平，関 優太，松岡邦枝，設楽浩志，日比野浩，木南 凌，吉川欣亮
• 通讯作者: 宮坂勇輝，安田俊平，関 優太，松岡邦枝，設楽浩志，日比野浩，木南 凌，吉川欣亮