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ＧＯＡＴ及びグレリン受容体の立体構造に基づいたグレリン脂肪酸修飾・認識機構の解明

基于GOAT和ghrelin受体三维结构阐明ghrelin脂肪酸修饰和识别机制

基本信息

批准号：
14J06159
负责人：
椎村祐樹
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University (2015)Kurume University (2014)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06159/
关键词：
GPCR グレリン構造解析 X線構造解析グレリン受容体

项目摘要

今年度はグレリン受容体の結晶構造解析に向けて、熱安定化変異体のスクリーニングおよび新規化合物による安定化効果のスクリーニング、精製グレリン受容体の結晶化に取り組んだ。これまでグレリン受容体の結晶化に成功していない理由として、グレリン受容体自身の基礎活性が非常に高いため、安定性が低く精製が困難であることが考えられた。そこで、受容体のさらなる安定化を図るために出芽酵母を用いた変異体スクリーニングを行った。その結果、受容体の安定性を向上させる新たな点変異を3箇所見出した。この結果をもとに、発現宿主を昆虫細胞に変更し、大量培養およびアフィニティーカラムによる精製を行ったところ、これらの変異体はこれまでのコンストラクトと比較して発現量も高く、再現よく精製できることが確認された。加えて、受託合成によってさらに2種類のグレリン受容体阻害剤を入手した。これらの阻害剤とこれまでの精製・結晶化で使用していた市販の阻害剤との熱安定性について比較検討したところ、新規阻害剤では、いずれも熱安定性が5度以上上昇することが確認された。現在、これらの検討に基づいて精製グレリン受容体の結晶化を試みているが、これまでのところ結晶は得られていない。今後、結晶化の条件などについて細かく検討していく必要があると考えられるが、変異体のスクリーニングおよび新規阻害剤の作製によってグレリン受容体の安定化を図れたことは研究全体を通して大きな成果であり、研究は着実に進展しているものと考えられる。

This year, the crystal structure analysis of the crystal. The basic activity of the crystallization of the receptor itself is very high, and the stability is low. The yeast is used to stabilize the host cell. The results, the stability of the receptor, and the three new findings The result is that the host cells are cultured in large quantities and refined in large quantities. Add to the list, the receiver synthesis, the two types of conversion, the receiver resistance agent started. The thermal stability of the new inhibitor was increased by more than 5 degrees. Now, during these discussions, we are trying to crystallize the refined crystal receptor, and this crystal has been successfully crystallized. In the future, the crystallization conditions will be improved, and the stability of the container will be improved. The research progress will be improved.