希少糖生産酵素Ｌ－リボースイソメラーゼの改良および希少オリゴ糖生産技術の開発

稀有糖生产酶L-核糖异构酶的改良及稀有低聚糖生产技术的开发

• 批准号: 14J06611
• 负责人: 寺見 優司
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J06611/
• 关键词: 希少糖; L-リボースイソメラーゼ; 結晶構造解析; ホスホリラーゼ; )糖脱水素酵素; 糖リン酸

1.L-リボースイソメラーゼのX線結晶構造解析と部位特異的変異を用いた酵素の機能改変L-リボースイソメラーゼの結晶構造解析を利用した触媒メカニズム等といった部分においては昨年度までで終えている。そのため、本年度は、本酵素を用いた希少糖生産に従事した。本酵素の熱安定性を向上させ、再利用を可能にするため、固定化L-リボースイソメラーゼを作成した。作成した固定化酵素と基質となる希少糖L-プシコースまたはD-タガトース（昨年度から徐々に生産している）を作用させ、希少糖L-アロース、D-タロースを生産した。生産に関しては、学術雑誌にて報告している。2.希少糖を構成単位とする新規の希少二糖・オリゴ糖を生産する技術の開発新規希少二糖・オリゴ糖の生産技術の開発を目的として、微生物の生産する糖脱水素酵素と糖ホスホリラーゼを組み合わせた反応により、新規希少二糖・オリゴ糖（次世代希少糖）の生産を試みた。(1)マルトースホスホリラーゼを用いた二糖生産を試みた。マルトースとアロースを基質として反応させると、マルトースからグルコース1リン酸を生成後、グルコース1リン酸とアロースが本酵素の逆反応にてGlucosyl(α1-4)Alloseが生産された。(2)糖脱水素酵素を用いた二糖生産も試みた。セロビオースを基質に用い、3-ケトセロビオースを生成し、これを還元することにより、Allosyl(β1-4)Glucoseを約50 mg生産した。また、マルトースも同様に反応させ、3-ケトマルトースを生産し、還元を行うことで、Allosyl(α1-4)Glucoseを生産した。(3)α-グルカンホスホリラーゼ等の他のホスホリラーゼも大量生産に成功した。ホスホリラーゼを用いて(1)・(2)において生産した希少二糖が作用するかどうかを今後は検討すべきと考える。

1. The analysis of the X-ray crystal analysis of the X-ray spectrum of the characteristic parts can be improved by using the enzyme machine to make the analysis of the X-ray structure of the X-ray spectroscopy. the use of the enzyme machine can change the analysis of the analysis of the results of the analysis of the X-ray structure of the X-ray. This year, this year, this enzyme is used to make sure that less sugar is used. This enzyme is stable, reused, immobilized and immobilized. To make the immobilized enzyme substrate, the immobilized enzyme, the immobilized enzyme. Graduate students, academic journals, reports and reports. two。 The new technology for the production of disaccharides and disaccharides, the technology for the production of disaccharides and disaccharides, the technology for the production of disaccharides and disaccharides, the technology for the production of disaccharides and disaccharides, the technology for the production of disaccharides and disaccharides, the technology for the production of disaccharides and disaccharides, the technology for the production of disaccharides, sugar, sugar, sugar, (1) try to use disaccharides in the first place. After the formation of acid, Glucosyl (α 1-4) Allose caused by the reverse reaction of this enzyme. (2) glucose dehydrase enzyme was used to produce disaccharides. For example, you need to use the basic data to generate data, and the Allosyl (β 1-4) Glucose is about 50 mg. This is the same as the countermeasure, the third, the second, the third, the third (3) A large number of people are born in large numbers, such as those who are successful. Please use (1) (2) to make sure that the biosaccharides have an effect on you.

项目成果

Structural insight into L-rhamnose isomerase from Mesorhizobium loti.

中索根瘤菌 L-鼠李糖异构酶的结构洞察。

• 发表时间: 2015
• 作者: Mami Kazama;Keiko Uechi;Yuji Terami;Haruhiko Sakuraba;Goro Takata
• 通讯作者: Goro Takata

Purification and characterization of the D-glucoside 3-dehydrogenase from m15-2.

m15-2 中 D-葡萄糖苷 3-脱氢酶的纯化和表征。

• 发表时间: 2015
• 作者: Akkharapimon Yotsombat;Goro Takata;Keiko Uechi;Yuji Terami
• 通讯作者: Yuji Terami

Crystal structure of L-ribose isomerase from Cellulomonas parahominis MB426.

副人纤维单胞菌 MB426 的 L-核糖异构酶的晶体结构。

• 发表时间: 2014
• 作者: Yuji Terami;Hiromi Yoshida;Keiko Uechi; Goto Takata;Shigehiro Kamitori
• 通讯作者: Shigehiro Kamitori

Mesorhizobium loti由来L-ラムノースイソメラーゼのX線結晶構造解析

中桑根瘤菌 L-鼠李糖异构酶的 X 射线晶体结构分析

• 发表时间: 2015
• 作者: Keiko Uechi;Haruhiko Sakuraba;Mami Kazama;Yuji Terami;Goro Takata
• 通讯作者: Goro Takata

Characterization of D-Glucoside 3-Dehydrogenase from Rhizobium sp. L35 and Its Application for D-Allose Production

• DOI: 10.12982/cmujns.2019.0019
• 发表时间: 2019-07
• 期刊: Chiang Mai University Journal of Natural Sciences
• 作者: Akkharapimon Yotsombat;K. Uechi;Shun Onishi;K. Mino;T. Hasegawa;K. Morimoto;Goro Takata